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软骨细胞存在于关节软骨中，负责分泌II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型。

1)  细胞来源于人的关节组织。

2)  细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。

3)  经鉴定细胞纯度高于90%。

4)  不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)  细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。
细胞系培养步骤：

细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉培养基，用1X PBS清洗2次。

加入进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DME培养基终止消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

‌细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉培养基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM培养基终止消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌。

‌细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉培养基，用1X PBS清洗2次。

加入进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM培养基终止消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉培养基，用1X PBS清洗2次。

加入进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM培养基终止消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌

细胞接收后的处理：

1）人软骨细胞永生化收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备MEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

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