小鼠原代输尿管上皮原代细胞

细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

商品属性：

形态：上皮细胞样
培养基：小鼠输尿管上皮细胞wan全培养基

培养环境：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代特征：可传5代左右；3代以内状态

细胞基本属性：

种属来源：小鼠

组织来源：输尿管输尿管

生长特性：贴壁生长

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率：每2-3天换液一次

消化液：

产品货期：5-6周左右

运输方式：T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：:小鼠输尿管上皮细胞采用先中性蛋bai酶消化、然后机械分离法使输尿管分层、最后胶原酶消化，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，小鼠输尿管上皮细胞分离自输尿管组织；输尿管上接肾盂，下连膀胱，是一对细长的管道，呈扁圆柱状，位于腹膜后，为一肌肉粘膜所组成管状结构，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处（输尿管起始处）；一个在越过小骨盆入口处；最后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管。临床上将输尿管分为上、中、下三段，也可称为腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处；盆段，自髂动脉到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口。输尿管管壁分为4层，黏膜层、固有层、肌层、外膜。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞；固有层由细密的结缔组织构成，内含胶原纤维和少量弹性纤维；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成；外膜为疏松结缔组织，营养血管由外膜进入输尿管。其中，输尿管上皮细胞主要分布于黏膜层。

原代细胞培养的主要步骤包括：

‌一、剥离组织，去除外膜、结缔组织等‌：将组织从动物体中取出，并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。

二、‌洗涤后将组织剪成1mm左右的小块‌：使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织，然后将其剪成约1mm大小的小块。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%的缓冲液中，进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化（37℃）或冷消化（4℃），热消化时间短，冷消化时间长但条件更温和。

‌四、吹打分散后，过滤、计数‌：将消化后的细胞吹打到一个离心管中，然后过滤、计数。

五、‌按30万/毫升分瓶培养‌：将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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