小鼠原代肾小管上皮原代细胞

商品属性：

细胞基本属性：

种属来源：小鼠

组织来源：肾脏肾脏

生长特性：贴壁生长

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率：每2-3天换液一次

消化液：

产品货期：5-6周左右

运输方式：T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：:小鼠肾小管上皮细胞采用先机械研磨过不锈钢网筛分离得到肾小管、后用胶原酶消化，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，小鼠肾小管上皮细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生suD3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。肾小管是机体肾脏器官上与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。肾小管按不同的形态结构、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和远端小管三部分；近端小管可分为直部和曲部，曲部也称为近曲小管，位于皮质迷路内，于肾小体附近高度蟠曲；远端小管曲部也称为远曲小管，位于皮质迷路内。肾小管上皮细胞是肾小管外面的一层细胞，肾小管上皮细胞的分离、培养是研究肾脏疾病的一项重要技术，目前该细胞分离方法有酶分离法、化学分离法筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法等。肾小管上皮细胞主要功能：①肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非营养物质进入终尿；③细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应；④移植肾炎症和新月体肾炎中PTEpiC表达IL-2R和MHC-Ⅱ类抗原，这说明肾小管上皮细胞参与肾免疫损伤的发生。随着对肾间质纤维化机制研究的日渐加深，肾小管上皮细胞（RTECs）在其中的作用日益被人们重视。因此，提供良好的肾小管上皮细胞模型，在肾小管间质疾病的发病机制和治疗药物筛选的研究中是非常重要的。肾小管与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收和排泌作用.肾小管按不同的形态结构，分布位置和功能分成三部分；近端小管、髓袢和远端小管。肾小管平均长约30-50mm，均由单层上皮构成，缺血、感染和毒物可引起肾小管上皮细胞变性坏死，导致肾功能障碍。醛固酮、抗利尿激素、心钠素、甲状旁腺激素等，也可导致肾小管功能改变。由于各段肾小管结构和功能不同，故出现功能障碍时表现各异。

细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

原代细胞培养的主要步骤包括：

‌一、剥离组织，去除外膜、结缔组织等‌：将组织从动物体中取出，并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。

二、‌洗涤后将组织剪成1mm左右的小块‌：使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织，然后将其剪成约1mm大小的小块。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%的缓冲液中，进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化（37℃）或冷消化（4℃），热消化时间短，冷消化时间长但条件更温和。

‌四、吹打分散后，过滤、计数‌：将消化后的细胞吹打到一个离心管中，然后过滤、计数。

五、‌按30万/毫升分瓶培养‌：将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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