产品及特点:
荧光定量PCR是在PCR体系中加入荧光化合物(荧光染料或荧光探针)。利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每个循环变得“可见”。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测探针法荧光定量PCR试剂盒的试剂盒。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
牛丘疹性口炎病毒探针法PCR荧光定量试剂盒 | Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV) | EY00P8750 |
运输及保存: 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。
自备试剂:样品 RNA。
分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
染料法
探针法
可进行相对,定量表达分析,定性分析,SNP检测等
实验报告
电泳图 ·标准曲线
溶解曲线 ·扩增曲线
完整的实验过程、试剂、仪器及分析报告
使用方法
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
7. 如果有N个样品,设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒RNAout。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR模板,省略了RNA提取步骤。
三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR 管,其中N+2个用于上步得到的 N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4 个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
(1R,2S)-1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基环烷甲酸细胞松驰素 E CYTOCHALASIN E(RG)(PLEASE CALL) Glutamate Dehydrogenase
2-溴-6-氟吡啶细胞松驰素 D CYTOCHALASIN D(RG) HOBT, 1-Hydroxybenzotriazole
3-吡啶基偕肟细胞松驰素 C CYTOCHALASIN C(RG) IDA, Iminodiacetic acid
2-氯-1-吗琳乙-1-酮细胞松弛素 B CYTOCHALASIN B(RG)(PLEASE CALL) Lithium lactate
乙酰乙酸乙酯钠盐细胞松驰素 A CYTOCHALASIN A(RG) Magnesium carbonate basic pentahydrate
三(2,4-戊二酮酸)铟(III)2-环己烷基环己酮 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG) Manganese dioxide
4-氨基-2-氯-5-甲基嘧啶2-环己烷基环己酮 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG) N,N'-Diphenylurea
5-溴-2,4-二氟甲苯环己 CYCLOHEXANONE(SG) PEG 600
4-羟基苯庚酮蓟苦素 CYNISIN(CNICIN)(RG) Prussian blue
5-溴-2,4-二氟甲苯菜蓟苦素 CYNAROPICRIN(AS) Pyronin B
1-糠基吡咯1,3-洋蓟素 DICAFFEOYLQUINIC ACID,1,3-(P)(AHP Verified) X-Galactosamidide
1-Cbz-4-(甲磺酰氧基)哌啶1,3-洋蓟素 DICAFFEOYLQUINIC ACID,1,3-(P)(AHP Verified) Fucoxanthin
2,3,4-三氟苯甲1,3-洋蓟素 DICAFFEOYLQUINIC ACID,1,3-(P)(AHP Verified) Brij 58
异酸2-溴苯酯CYNARIN(ECHINACEA)(P)(PLEASE CALL)(SEE PART# 3991) Dithiooxamide
去甲托品盐酸盐CYNARIN(ECHINACEA)(P)(PLEASE CALL)(SEE PART# 3991) DNase II, from Pocine Pancreas
牛丘疹性口炎病毒探针法PCR荧光定量试剂盒防御素β1(DEFβ1)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>99%,S构型6次/盒
小核糖核蛋白多肽C(SNRPC)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>98.5%,USP,BR,可用于细胞培养 6次/盒
γ-谷氨酰转移酶1(γGT1)(酶联免疫吸附试验法)(标准品) 质量规格:HPLC>98%,标准品100ml
癌易感蛋白1(BRCA1)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>98.5%,CP2005,半水合物6次/盒
间羟肾上腺素(MN)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>98.0%,熔点181ml(500X)
垂草扁桃酸(VMA)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>98.5%,BR3×1ml
中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)(酶联免疫吸附试验法) 质量规格:>99%,BR6次/盒
中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)(酶联免疫吸附试验法)(标准品) 质量规格:HPLC>98%,标准品500 ml