人原代肝窦内皮原代细胞
细胞培养操作:

收货处理取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态
传代密度细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养
传代代数可传5代左右;3代以内状态
传代比例传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
传代方法:
1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml培养基终止消化;
3.用吸管轻轻吹打混匀,按1:2比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4.待细胞贴壁后,培养观察;之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。
商品属性:

规格 | 5x105cells/T25或1mL冻存管 | 货号 | EY-XY3308 |
种属来源 | 人 | 组织来源 | 肝脏组织 |
生长特性 | 贴壁生长 | 形态特征 | 内皮细胞样 |
形态:内皮细胞样
培养基:人肝窦内皮细胞专用培养基
培养环境:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
传代特征:可传5代左右;3代以内状态

细胞基本属性:

种属来源:人
组织来源:肝脏组织肝脏组织
生长特性:贴壁生长
产品规格:5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率:每2-3天换液一次
消化液:0.25%胰蛋bai酶
产品货期:7-8周左右
运输方式:T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮)
供应限制:仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
背景介绍::人原代肝窦内皮细胞分离自肝脏组织;肝窦内皮细胞是肝脏非实质细胞中数目最多的细胞,约占肝非实质细胞总数的70%,在表型、功能上与普通毛细血管内皮细胞有较大差异。肝窦内皮细胞之间缺乏细胞间连接,细胞下基底膜物质很少,因此窦内皮通透性较高,有利于调节物质交换。不同于肝细胞的自我复制,肝再生时新生LSECs主要来自肝内外其他细胞成分的分化替代,不少研究证实了肝再生时LSECs的骨髓源性替代。内皮祖细胞是参与这一过程的主要细胞成分。窗孔是肝窦内皮细胞具特征性的结构,从<10nm至1~2um不等,生理条件下由于窗孔结构的存在和缺乏内皮下完整基膜的结构,由肝窦内皮细胞构成的肝窦壁是全身毛细血管壁中缺乏基膜的毛细血管,除窦内的血细胞外,血浆成分均能从窗孔进入Disse间隙,进行物质交换。
原代细胞培养的主要步骤包括:

一、剥离组织,去除外膜、结缔组织等:将组织从动物体中取出,并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。
二、洗涤后将组织剪成1mm左右的小块:使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织,然后将其剪成约1mm大小的小块。
三、用0.1%~0.2%的消化:将剪碎的组织块加入含有0.1%~0.2%的缓冲液中,进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化(37℃)或冷消化(4℃),热消化时间短,冷消化时间长但条件更温和。
四、吹打分散后,过滤、计数:将消化后的细胞吹打到一个离心管中,然后过滤、计数。
五、按30万/毫升分瓶培养:将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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