人原代膀胱成纤维原代细胞

细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

商品属性：

细胞基本属性：

种属来源：人

组织来源：膀胱膀胱

生长特性：贴壁生长

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

产品货期：7-8周左右

运输方式：T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：:人膀胱成纤维细胞采用胰蛋bai酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，人膀胱成纤维细胞分离自膀胱组织；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。

原代细胞培养的主要步骤包括：

‌一、剥离组织，去除外膜、结缔组织等‌：将组织从动物体中取出，并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。

二、‌洗涤后将组织剪成1mm左右的小块‌：使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织，然后将其剪成约1mm大小的小块。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%的缓冲液中，进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化（37℃）或冷消化（4℃），热消化时间短，冷消化时间长但条件更温和。

‌四、吹打分散后，过滤、计数‌：将消化后的细胞吹打到一个离心管中，然后过滤、计数。

五、‌按30万/毫升分瓶培养‌：将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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