人原代肾足原代细胞

细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

商品属性：

细胞基本属性：

种属来源：人

组织来源：肾脏肾脏

生长特性：贴壁生长

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

产品货期：7-8周左右

运输方式：T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：:肾小球为血液过滤器，肾小球毛细血管壁构成过滤膜。肾小球过滤膜从内到外有三层结构：内层为内皮、中层为肾小球基膜、外层为上皮细胞层，上皮细胞又称足细胞，其不规则突起称足突，其间有许多狭小间隙，血液经滤膜过滤后，滤液入肾小球囊。在正常情况下，血液中绝大部分蛋白质不能滤过而保留于血液中，仅小分子物质如尿素、葡萄糖、电解质及某些小分子蛋白能滤过。

肾足细胞即肾小球上皮细胞，它附着于肾小球基底膜的外侧，连同肾小球基底膜和肾小球基膜一起构成了肾小球血液滤过屏障。又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。

足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与肾小球基底膜相连。足细胞在正常情况下可以分泌肾小球基底膜的主要组成成分IV型胶原和纤维连接蛋白,

在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋bai酶和组织蛋bai酶，从而在肾小球基底膜的代谢平衡中发挥重要作用。

原代细胞培养的主要步骤包括：

‌一、剥离组织，去除外膜、结缔组织等‌：将组织从动物体中取出，并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。

二、‌洗涤后将组织剪成1mm左右的小块‌：使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织，然后将其剪成约1mm大小的小块。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%的缓冲液中，进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化（37℃）或冷消化（4℃），热消化时间短，冷消化时间长但条件更温和。

‌四、吹打分散后，过滤、计数‌：将消化后的细胞吹打到一个离心管中，然后过滤、计数。

五、‌按30万/毫升分瓶培养‌：将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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