人原代食管平滑肌原代细胞

商品属性：

细胞基本属性：

种属来源：人

组织来源：食管食管

生长特性：贴壁生长

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

产品货期：7-8周左右

运输方式：T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：:人食管平滑肌细胞采用胰蛋bai酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，人食管平滑肌细胞分离自食管组织；食管可分为颈段、胸段和腹段，脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，肌层上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成。其中，肌纤维的排列方式分为内环形和外纵形两层。食管的蠕动是由食管平滑肌收缩严格控制，食管还有括约肌，位于环状软骨水平的，称为食管上括约肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿过膈孔，另一部分在膈下的高压带，称为食管下括约肌。食管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

原代细胞培养的主要步骤包括：

‌一、剥离组织，去除外膜、结缔组织等‌：将组织从动物体中取出，并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。

二、‌洗涤后将组织剪成1mm左右的小块‌：使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织，然后将其剪成约1mm大小的小块。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%的缓冲液中，进行消化。消化时间可根据具体实验需求选择热消化（37℃）或冷消化（4℃），热消化时间短，冷消化时间长但条件更温和。

‌四、吹打分散后，过滤、计数‌：将消化后的细胞吹打到一个离心管中，然后过滤、计数。

五、‌按30万/毫升分瓶培养‌：将计数后的细胞按30万/毫升的浓度分瓶培养。

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