本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PCK）蛋白浓度。检测范围覆盖0.313-20 ng/mL，灵敏度达0.16 ng/mL，适用于糖异生代谢、能量代谢及代谢性疾病研究等领域。

核心原理：

‌固相化‌：微孔板预先包被抗小鼠PCK抗体。

‌结合‌：加入标准品或样本，PCK被固相抗体捕获。

‌检测‌：加入化的抗小鼠PCK抗体和HRP标记的亲和素，形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

‌显色‌：加入TMB底物，被HRP催化后由蓝色变为黄色。

‌测定‌：用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与OD值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

操作步骤：

1.加样孵育

每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本，空白孔加等量样本稀释液；贴封板膜密封微孔板，置于 37℃恒温孵育箱，避光孵育 90min，保证抗原抗体充分结合。

2.洗板

轻柔弃去孔内液体，吸水纸上快速拍干；每孔加满洗涤工作液，静置浸泡 30s，甩干拍净；重复洗涤5 次，去除未结合杂质，降低背景值。

3.加酶结合物孵育

除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体；轻微水平晃板混匀，重新封板，37℃避光恒温孵育 60min。

4.二次洗板

重复上述洗板操作 5 次

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