本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的骨桥素（OPN）蛋白浓度。检测范围覆盖0.313-20 ng/mL，灵敏度达0.16 ng/mL，适用于骨代谢、肿瘤转移及免疫调控研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗小鼠OPN抗体。

结合：加入标准品或样本，OPN被固相抗体捕获。

检测：加入纯化的抗小鼠OPN抗体和HRP标记的亲和素，形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

显色：加入TMB底物，被HRP催化后由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与OD值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

操作步骤：

1. 试剂回温至 20–25℃，稀释洗涤液、梯度配制标准品。

2. 每孔加 100μL 标准 / 样本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。

3. 加 HRP 抗体，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。

4. 加 TMB 避光显色 15min，加终止液混匀。

5. 450nm 快速测 OD 值，拟合曲线算浓度。

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