本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的核因子-κB亚基p65亲和肽（NF-κB p65）蛋白浓度。检测范围覆盖0.313-20 ng/mL，灵敏度达0.16 ng/mL，适用于炎症反应、免疫调控及肿瘤进展研究等领域。

核心原理：

‌固相化‌：微孔板预先包被抗小鼠NF-κB p65抗体。

‌结合‌：加入标准品或样本，NF-κB p65被固相抗体捕获。

‌检测‌：加入纯化的抗小鼠NF-κB p65抗体和HRP标记的亲和素，形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

‌显色‌：加入TMB底物，被HRP催化后由蓝色变为黄色。

‌测定‌：用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与OD值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

关键实操技巧：

1.加样技巧

一次性换新枪头，垂直贴孔壁低位加液；避免气泡、飞溅交叉污染；整板加样速度均匀统一。

2.温育控温

须37℃恒温、封板膜严实防蒸发冷凝；时间严格卡死，过长背景高、过短信号低。

3.洗板核心

每孔注满不溢出，浸泡≥30 s；拍干用无尘吸水纸，杜绝残留；洗板不足直接高背景、假阳性。

4.样本规范

杜溶血、脂浊、污染样本；禁止反复冻融；严禁含 NaN₃抑制 HRP 活性；浓度超标只用试剂盒配套稀释液。

5.显色与读数

全避光；整板显色时长一致；加终止液立刻读数，放置越久数值漂移越大。

6.基础质控

样本、标准均做复孔；室温洁净避光操作；试剂分装取用，减少反复开盖失效。

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