产品简介：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆中的 III 型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于肝纤维化、肺纤维化、胶原合成及组织纤维化研究等领域。

产品名称：小鼠III型前胶原氨基末端肽elisa试剂盒

英文名称：PⅢNP ELISA Kit

产品规格：48T/96T

产品货号：CS-1350E

检测原理：

小鼠 III 型前胶原氨基末端肽 (PⅢNP) elisa 试剂盒的原理是双抗体夹心法，通过固相载体捕获抗原，再用酶标记的检测抗体进行识别，最后通过底物显色反应来定量检测。

固相化：微孔板预先包被抗小鼠 PⅢNP 抗体。

结合：加入标准品或样本，PⅢNP 被固相抗体捕获。

检测：加入生物su化的抗小鼠 PⅢNP 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

实验步骤‌：

‌试剂准备‌：将试剂盒平衡至室温(20-25℃)，洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。

‌加样‌：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

‌洗涤‌：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。

‌加检测抗体‌：每孔加入100μL检测抗体-HRP，37℃孵育60分钟。

‌洗涤‌：同步骤3。

‌显色‌：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分钟。

‌终止‌：每孔加入50μL终止液，立即摇匀（颜色由蓝变黄）。

‌检测‌：450nm波长测定吸光度(OD值)，15分钟内完成。

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操作步骤‌：

1.加样孵育

每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本，空白孔加等量样本稀释液；贴封板膜密封微孔板，置于 37℃恒温孵育箱，避光孵育 90min，保证抗原抗体充分结合。

2.洗板

轻柔弃去孔内液体，吸水纸上快速拍干；每孔加满洗涤工作液，静置浸泡 30s，甩干拍净；重复洗涤5 次，去除未结合杂质，降低背景值。

3.加酶结合物孵育

除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体；轻微水平晃板混匀，重新封板，37℃避光恒温孵育 60min。

4.二次洗板

重复上述洗板操作 5 次，严格拍干孔内残留液体，杜绝残留洗液造成假阳性、数据偏差。

5.底物显色

避光条件下，每孔加入 90μL TMB 底物显色液，轻柔混匀；37℃避光精准孵育 10~15min，此时液体逐步显现蓝色，显色深浅与待测物含量正相关。

6.反应终止

严格遵循加样顺序，每孔快速加入 50μL 酸性终止液，轻晃微孔板充分混匀，蓝色即刻转为黄色，终止酶促显色反应。

7.上机读数检测

加终止液后15min 内，用酶标仪测定各孔 450nm 波长吸光度（OD 值）；以标准品浓度为横坐标、OD 值为纵坐标绘制标准曲线，拟合方程计算待测样本目标蛋白浓度。