本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的补体片断 5a（C5a）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于补体系统、炎症趋化及免疫损伤研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗小鼠 C5a 抗体。

结合：加入标准品或样本，C5a 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗小鼠 C5a 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

操作步骤：

1. 试剂准备将试剂盒平衡至室温（20-25℃），浓缩洗涤液按 1:20 稀释备用。标准品按说明书进行梯度稀释，配制系列浓度标准曲线溶液。
2. 实验流程加样：设置空白孔、标准孔、待测样品孔，空白孔仅加稀释液，其余孔分别加入标准品或待测样品，37℃孵育。加酶标抗体：除空白孔外，每孔加入酶标抗体，轻轻混匀，37℃避光孵育。洗涤：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后甩干，重复洗涤 4-5 次，最后拍干残留液体。显色：每孔加入 TMB 显色液，37℃避光孵育，孔内呈现蓝色。终止：每孔加入终止液，混匀后颜色由蓝色转为黄色。检测：在 450nm 波长下测定各孔 OD 值，15 分钟内完成读数。

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