产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测小鼠血清、血浆中的胰岛素自身抗体(IAA)水平。检测范围覆盖常规科研适配区间,灵敏度满足微量样本检测需求,适用于 1 型糖尿病研究、自身免疫性胰岛损伤、免疫耐受及糖尿病早期筛查相关研究等领域。
产品名称:小鼠胰岛素自身抗体(IAA)elisa试剂盒
英文名称:IAA ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-0591E
检测原理:

小鼠胰岛素自身抗体 (IAA) ELISA 试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被胰岛素抗原。
结合:加入标准品或样本,IAA 与固相抗原结合。
检测:加入酶标记的抗小鼠免疫球蛋白二抗,形成 "抗原 - 抗体 - 酶标二抗" 复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),抗体水平与 OD 值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1、试剂与样本准备:
将试剂盒平衡至室温(20-25℃),按说明书稀释洗涤缓冲液(通常1:19)。
标准品:用梯度稀释至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列浓度。
样本:血清、血浆或组织匀浆上清。若t-PA浓度高,可按说明书(如1:10)稀释。
2、加样与孵育:
每孔加入100μL标准品或样本。
轻轻振荡混匀,避免触碰孔壁。
37℃孵育90分钟(部分试剂盒可能为120分钟,需以说明书为准)。
3、洗涤:
弃去孔内液体,用洗涤缓冲液加满每孔,静置30秒后甩干,重复5-6次。
4、加检测抗体与孵育:
每孔加入100μL化抗猪t-PA检测抗体。
37℃孵育60分钟。
5、再次洗涤:
同步骤3,洗去未结合抗体。
6、显色:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分钟。
7、终止与测定:
每孔加入50μL终止液,立即混匀(颜色由蓝变黄)。
在加终止液后15分钟内,用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度(OD值)。