本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的 KI-67 抗原（MKI67）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于细胞增殖、肿瘤生长及组织再生研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗小鼠 MKI67 抗体。

结合：加入标准品或样本，MKI67 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗小鼠 MKI67 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

操作步骤：

1.试剂平衡试剂盒室温平衡 30 min；浓缩洗涤液按说明书稀释混匀。

2.设孔加样设空白、标准品、待测样品孔，精准加样，封板。

3.温育结合37℃孵育 30–60 min，弃液拍干。

4.洗板加满洗涤液浸泡，甩干拍干，重复3–5 次。

5.加酶结合物除空白孔外每孔加 HRP 标记液，封板 37℃孵育。

6.再次洗板充分洗净未结合游离酶，控干残留液体。

7.显色避光加显色液 A/B，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数加终止液变色稳定后，立刻酶标仪读 OD 值。

9.结果计算标准曲线拟合，换算样本浓度。

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