细胞名称 肝永生化细胞;THLE-3
形态特性: 上皮细胞
生长特性: 贴壁生长
特征特性: THLE-2(ATCCCRL-10149和THLE-3(ATCCCRL-11233)细胞系是正常肝细胞用SV40大T抗原转染得到。将含有SV40T抗原的BglI-HpaI片段的逆转录病毒载体导入兼嗜性包装细胞株PA317中病毒。THLE-2andTHLE-3表达正常成人肝上皮细胞特征性的表型。当注射到无胸腺裸鼠中时,它们不成瘤,具有接近二倍体的核型,不表达甲胎蛋白。
培养条件: CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培养基(目录号CC3170)。套装包含了500毫升基本培养基及分别冻存的添加剂,我们不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况: PN5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
产品名称 | 肝永生化细胞;THLE-3 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63903 |
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
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ATP结合盒转运体B1检测试剂盒细胞名称: 人肺癌耐药株;A549/cis形态特性: 上皮样ATP-binding cassette transporter B1
磷化tau—199蛋白检测试剂
L-别MSK2 (D41A4) XP® Rabbit mAb3,5-二叔丁基
L-Histone H3 (96C10) Mouse mAb (IHC Formulad)氨基-N-甲基苄
L-二甲酯MST1 Antibody(N-BOC-氨基)酸
GSK2636771MST1 Antibody二基三氟化硫
Cbz-L-苄酯5-Carboxylcytosine (5-caC) (D7S8U) Rabbit mAb2-羟基-6-甲基
(+)-2-甲基-L-GAPDH (14C10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)吡硫钠
3,二基-L-氨酸TRADD (7G8) Rabbit mAb异己酰
α-甲基-L-氨酸TRADD (7G8) Rabbit mAb5-氨基-2-溴-甲基吡啶
L-天冬氨酸二甲酯盐酸盐TCEB3/Elongin A Antibody2--甲基-5-氟吡啶
L-半甲酯盐酸盐p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb2-溴-5-氟-甲基吡啶
甲酯盐酸盐p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb2-(三氟甲基)酸
L-二甲酯盐酸盐HMGCS1 (D5W8F) Rabbit mAb1-氟--5-
L-甲酯盐酸盐ASM AntibodyN-叔丁基哌
L-异甲酯盐酸盐p27 Kip1 (D37H1) Rabbit mAb2,6-二叔丁基-甲基吡啶
L-氨酸甲酯盐酸盐Phospho-eEF2k (Ser366) Antibody肼基甲酸
L-甲酯盐酸盐Phospho-eEF2k (Ser366) AntibodyN-(2-甲氧基基)甲基
L-甲酯盐酸盐eEF2k Antibody2-基-5-嘧啶
L-甲酯盐酸盐Perforin Antibody (Mouse Specific)5-溴-2-基嘧啶
L-甲酯TRADD Antibody
L-半酯盐酸盐LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸单甲酯盐
L-氨酸酯盐酸盐GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羟基嘧啶盐酸盐
酯盐酸盐DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)酮
L-蛋氨酸酯盐酸盐;L-酯盐酸盐FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟酸酯
L-酯盐酸盐p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲
L-天冬氨酸-β-苄酯/L-天冬氨酸-苄酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氢-2-异丁氧基喹啉-1-甲酸异丁酯
L--γ-苄酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯
L-氨酸苄酯盐酸盐β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巯基
L-苄酯盐酸盐β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羟甲基咪唑盐酸盐
L--L-盐TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羟甲基噻唑
L--α-酮戊二酸盐(2:1)GRB10 Antibody(二甲氨基)缩二甲
S-酰半盐酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氢-2-氧代-2H-环戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-联]-甲酸酯
O-叔丁基-L-甲酯盐酸盐ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶
L-氨酸异酯盐酸盐ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物
L-叔丁酯TNF-α Antibody-硝
L-天冬酰甲酯盐酸盐JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸
L-天冬氨酸二叔丁基酯盐酸盐TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代吗啉-1,1-二氧化物
as9-533形态特性: 上皮样Crimean-Congo hemorrhagic fever
肝永生化细胞;THLE-3表没食子儿茶素970-74-1英文名:(−)-Epigallocatechin
英文别名:epi-;(-)-EGC;(-)-EGC;NSC 674039;Sunphenon EGC;epigallocatechol;EPIGALLOCATECHIN;Galloepicatechin;Greenteacatechins;l-epigallocatechin
CAS登录号:970-74-1
分子式:C15H14O7
分子量:306.27
分子结构:
外观:白色粉末
规格:20 mg/支
纯度:≥ 98%
用途:用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源:绿茶中提取得到。
溶解性:溶于,乙醇,不溶于。
熔点:208-210°C
旋光度:-50 º (c=0.04, EtOH)
药理药效:具有很好的抗氧化活性,今年研究该化合物也具有一定的抗肿瘤活性。
贮存条件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年