产品简介:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测小鼠血清、血浆、胃组织及脑组织匀浆中的 ghrelin 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于食欲调控、能量代谢、生长激素分泌、肥胖及胃肠内分泌研究。
产品名称:小鼠生长激素释放肽酶联免疫试剂盒
英文名称:ghrelin ELISA Kit
产品规格:48T/96T
货号:CS-00M105021
检测原理:
小鼠生长激素释放肽 (ghrelin) 酶联免疫试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗小鼠 ghrelin 抗体。
结合:加入标准品或样本,ghrelin 被固相抗体捕获。
检测:加入化的抗小鼠 ghrelin 抗体和 HRP 标记亲和素,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
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实验步骤:
1. 试剂准备
将试剂盒所有组分平衡至室温(20–25℃,≥30min);浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。
标准品用标准品稀释液复溶,梯度稀释,配置系列浓度梯度标准溶液,备用。
2. 实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、样本孔,每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本,封板,37℃恒温孵育 90 min。
洗涤:弃净孔内液体,每孔加满洗涤工作液,静置 30 s,甩干拍净,重复洗涤 5 次。
加酶结合物:每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体,封板混匀,37℃孵育 60 min。
洗涤:重复上述洗涤步骤 5 次,拍干微孔。
显色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液,轻柔混匀,37℃避光显色 15 min。
终止:按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液,轻晃混匀,溶液由蓝转黄。
读数:15 min 内,酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值,拟合标准曲线计算样本含量。
3. 关键质控要点
全程孵育使用专用封板膜,防止液体蒸发、交叉污染。
洗涤充分为实验核心,残留洗液易造成背景偏高、假阳性。
TMB 显色液避光储存,现用现加,严禁接触氧化剂。
加终止液顺序需与显色加样一致,避免局部色差、绿色残留。