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产品名称 | 牛肾细胞;MDBK |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63436 |
细胞名称 牛肾细胞;MDBK
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 1957年2月18日,MadinSH和DarbyNB从一只表观正常的成年牛肾脏建立了MDBK细胞株,可用于定量检测逆转录病毒的复制。
培养条件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
传代方法: 1:2~1:4传代,每周换液2次。
传代情况: C4
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
SB Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 人肾癌细胞;A498 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
Sample Diluent Conc 2 (2X) (250 ML)细胞名称: 人细胞;C-33A MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Sample Diluent Conc 1 (5X) (1 PK)细胞名称: 人B淋巴细胞瘤细胞;RAMOS RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Sample Collection Shipper Kt (1 KT)细胞名称: 人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%FBS
Sample Collect Kit - Small (1 KT)细胞名称: 大鼠脑胶质瘤细胞;C6 F10:Ham'sF10NutrientMixture2.5%FBS+15%HS
Sample Collect Kit - Medium (1 KT)细胞名称: 兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF F12:Ham'sF12NutrientMixture5%FBS
Sample Collect Kit - Large (1 KT)细胞名称: 人鼻咽癌细胞;E-2Z[E2Z] RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Salmon Sperm DNA (5 x 1 mL) (5 ML)细胞名称: 人胚胎肠粘膜组织来源细胞;CCC-HIE-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%FBS
rzeVEGF 165, CF (10 UG)细胞名称: 人T淋巴瘤转基因细胞;JurkatD,E RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rzeVEGF 165 (10 UG)细胞名称: 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%FBS
rzeTie-2/Fc, CF (100 UG)细胞名称: 人细胞;Hela229[HeLa229] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rzeEphrin-B2/Fc, CF (200 UG)细胞名称: Sars结构蛋白表达株;293001B IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium10%FBS;500ug/mlIL-2
rzeBMP-4, CF (10 UG)细胞名称: Sars结构蛋白表达株;293001A IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium10%FBS
rzeBMP-4 (10 UG)细胞名称: 大鼠肝细胞瘤;H-4-II-E MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
rzeBMP-2a, CF (10 UG)细胞名称: 人细胞;HelaP10s-11F DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rzeBMP-2a (10 UG)细胞名称: 大鼠肝细胞瘤;H4-II-E-C3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%HS+5%FBS
牛肾细胞;MDBK人维生素D受体(VDR)ELISA试剂盒IL-4ELISAKIT产品规格:48T/96T。
人脂联素(ADP)ELISA试剂盒IL-4ELISAKit产品规格:48T/96T。
人鸟苷交换因子(GEF)ELISA试剂盒IL-4ELISAKit产品规格:48T/96T。
人维生素A(VA)ELISA试剂盒IL-4ELISAKit产品规格:48T/96T。
人维生素E(VE)ELISA试剂盒IL-4ELISAKit产品规格:48T/96T。
人维生素D2(VD2)ELISA试剂盒IL-4ELISAKIT产品规格:48T/96T。
人维生素D3(VD3)ELISA试剂盒IL-5ELISAKIT产品规格:48T/96T。
人维生素B12(VB12)ELISA试剂盒IL-5ELISAKIT产品规格:48T/96T。