实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7 | 贴壁生长 | EY-X63661 |
细胞名称 非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7
形态特性: 上皮样细胞
生长特性: 贴壁生长
特征特性: Vero-HCV-P7细胞整合有丙型肝炎病毒的P7基因,能稳定表达P7蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室于2008年构建并保存。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法: 1:3传代,2-3天传一代
传代情况: C23
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
Indole-3-acrylic acid methyl ester
CAS No.:19626-92-7
中文名:
分子式:C12H11NO2
桤木 订购|咨询 前列腺性酶(ACP3) 规格: 20mg
泊金 订购|咨询 前列腺性酶(ACP3) 规格: 20mg
甾 订购|咨询 前列腺性酶(ACP3) 规格: 20mg
去泽拉木醛 订购|咨询 前折叠蛋白亚基1(PFDN1) 规格: 20mg
姜 订购|咨询 前折叠蛋白亚基2(PFDN2) 规格: 20mg
环氧泽泻 订购|咨询 前折叠蛋白亚基3(PFDN3) 规格: 20mg
瓜子金皂苷己 订购|咨询 前折叠蛋白亚基4(PFDN4) 规格: 20mg
番泻苷D 订购|咨询 前折叠蛋白亚基5(PFDN5) 规格: 10mg
莪术 订购|咨询 前折叠蛋白亚基6(PFDN6) 规格: 20mg
冬凌草素 订购|咨询 前庭蛋白1(VEST1) 规格: 10mg
大黄 订购|咨询 前胰淀粉样蛋白(ProIAPP) 规格: 20mg
鸢尾黄素 订购|咨询 前α(PTMα) 规格: 20mg
苦杏仁苷 订购|咨询 前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1) 规格: 20mg
蝙蝠葛 订购|咨询 前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1) 规格: 20mg
表告依春 订购|咨询 前胶原赖2二5双加氧酶1(PLOD3) 规格: 20mg
阿马 订购|咨询 前脑肽(PENK) 规格: 20mg
内酯 订购|咨询 前脑肽(PENK) 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
薯蓣皂甙 订购|咨询 前梯度蛋白2(AGR2) 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
HDGF 肝癌衍生生长因子抗体(高迁移率族蛋白1样蛋白2抗体) 现货供应 0.2ml Lornoxicam
HOXB2 同源盒蛋白B2抗体 现货供应 0.1ml Losartan Potassium
HOXB8 同源盒蛋白B8抗体 现货供应 0.2ml Losartan Potassium
HSPA6 热休克蛋白70家族蛋白6抗体 现货供应 0.2ml Masitinib
Id1 DNA结合抑制因子1抗体 现货供应 0.2ml Mecillinam
LAPTM4B 溶酶体蛋白跨膜β4抗体 现货供应 0.2ml Medroxyprogesterone
LDOC1/BCUR1 癌症亮拉链下调因子1抗体 现货供应 0.2ml Medroxyprogesterone
LOXL2 赖酰氧酶相关蛋白2抗体 现货供应 0.2ml Methimazole
玫瑰红 进口、国产 英文名称:RoseBengal 含量:超纯,99%
玫瑰红 进口、国产 英文名称:Rosolicacid 含量:IND,82%
玫瑰红银试剂 进口、国产 英文名称:4Dimethylaminobenzalrhodanine 含量:ACS,90%
玫棕 进口、国产 英文名称:Rhodizonicacidsodiumsalt 含量:试剂级,98%
媒染蓝29 进口、国产 英文名称:ChromeazurolS 含量:BS
媒染蓝B 进口、国产 英文名称:AcidalizarinblueB 含量:ACS级
美康 进口、国产 英文名称:Miconazolenitrate 含量:19000~119000,液体,6条带
镁 进口、国产 英文名称:Magnesium 含量:AR,99.5%
门冬酰酶 进口、国产 英文名称:AsparaginasefromEscherichiacoli 含量:BR,98%
锰 进口、国产 英文名称:Manganese 含量:AR,40%
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7麦康凯琼脂规格:250g用途:用于肠道致病菌的选择性分离、培养
CC琼脂添加剂规格:1ml*5支用途:每支添加于90mlCC琼脂基础中
药敏纸片规格:30ug/片,20片/瓶用途:用于药物体外敏感性试验
大豆酪蛋白消化物培养基(USP)颗粒规格:250g用途:用于药品的无菌检测
牛奶培养基规格:250g用途:用于乳菌凝固力及乳鉴别试验
无菌采样袋(12cm*18cm)(带压条)规格:100个/包用途:用于样品的采样(小号采样袋)