产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞外基质中的 I 型胶原(COL1)蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于骨代谢、纤维化疾病、组织修复、骨质疏松及肿瘤侵袭研究等领域。
产品名称:大鼠I型胶原(COL1)elisa试剂盒
英文名称:COL1 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-6187E
检测原理:

大鼠 I 型胶原 (COL1) ELISA 试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗大鼠 COL1 抗体。
结合:加入标准品或样本,COL1 被固相抗体捕获。
检测:加入生物su化的抗大鼠 COL1 抗体和 HRP 标记的亲和素,形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
实验步骤:

1.试剂提前室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔,精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应,结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗,重复洗板 3–5 次,去除未结合杂质。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶结合物,再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体,保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色,待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应,颜色由蓝转黄,即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算,得出样本目标物质浓度。
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操作步骤:

1、试剂与样本准备:
将试剂盒平衡至室温(20-25℃),按说明书稀释洗涤缓冲液(通常1:19)。
标准品:用梯度稀释至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列浓度。
样本:血清、血浆或组织匀浆上清。若t-PA浓度高,可按说明书(如1:10)稀释。
2、加样与孵育:
每孔加入100μL标准品或样本。
轻轻振荡混匀,避免触碰孔壁。
37℃孵育90分钟(部分试剂盒可能为120分钟,需以说明书为准)。
3、洗涤:
弃去孔内液体,用洗涤缓冲液加满每孔,静置30秒后甩干,重复5-6次。
4、加检测抗体与孵育:
每孔加入100μL化抗猪t-PA检测抗体。
37℃孵育60分钟。
5、再次洗涤:
同步骤3,洗去未结合抗体。
6、显色:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分钟。
7、终止与测定:
每孔加入50μL终止液,立即混匀(颜色由蓝变黄)。
在加终止液后15分钟内,用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度(OD值)。