产品简介:

本试剂盒采用速率法酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆中的 D - 乳酸脱氢酶(D-LDH)活性。检测范围覆盖 0.313-20 U/L,灵敏度达 0.16 U/L,适用于肠道黏膜损伤、细菌感染、代谢紊乱及肝功能检测研究等领域。
产品名称:大鼠D-乳酸脱氢酶(D-LDH)elisa试剂盒
英文名称:D-LDH ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-6199E
检测原理:

大鼠 D - 乳酸脱氢酶 (D-LDH) ELISA 试剂盒的原理是速率法,通过 D-LDH 催化乳酸的氧化反应,生成的产物与显色剂作用,利用吸光度变化速率定量检测酶活性。
固相化:微孔板预先包被 D-LDH 特异性反应底物。
结合:加入标准品或样本,D-LDH 催化底物发生氧化还原反应生成显色产物。
检测:加入显色剂,与产物发生特异性显色反应。
显色:显色剂随产物生成量逐渐变色,颜色深浅与 D-LDH 活性相关。
测定:用酶标仪在 450nm 波长连续测定吸光度变化速率,活性与速率值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1.平衡试剂:试剂盒室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按比例稀释备用。
2.加样:设空白孔、标准品孔、样品孔,每孔加对应标准品 / 稀释后样本,封板温育。
3.温育反应:37℃孵育 30–60 min,完成抗原抗体结合。
4.洗板:弃液甩干,洗涤液注满每孔,浸泡后拍干,重复洗板3–5 次。
5.加酶结合物:除空白孔外,每孔加入 HRP 标记抗体,封板 37℃再次温育。
6.再次洗板:同上述洗板流程,洗净未结合游离酶标物。
7.显色:每孔先后加入 A、B 显色液,避光 37℃显色 10–15 min。
8.终止读数:加终止液终止反应,颜色由蓝变黄;立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。
9.结果计算:以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线,换算样本待测指标浓度。