产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测小鼠组织匀浆、细胞提取物中的 Smad1 蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于 BMP/TGF-β 信号通路、细胞分化、胚胎发育及转录调控研究等领域。
产品名称:(Smad1)elisa试剂盒
英文名称:Smad1 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-1323E
检测原理:

小鼠 Smad1elisa 试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗小鼠 Smad1 抗体。
结合:加入标准品或样本,Smad1 被固相抗体捕获。
检测:加入生物su化的抗小鼠 Smad1 抗体和 HRP 标记的亲和素,形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1.试剂提前室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔,精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应,结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗,重复洗板 3–5 次,去除未结合杂质。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶结合物,再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体,保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色,待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应,颜色由蓝转黄,即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算,得出样本目标物质浓度。