产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠组织匀浆、细胞核提取物中的 70kDaDNA 结合亚基(RPA1)蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于 DNA 复制、DNA 损伤修复、细胞周期调控及肿瘤研究等领域。
产品名称:70kDaDNA结合亚基(RPA1)elisa试剂盒
英文名称:RPA1 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-5929E
检测原理:

大鼠 70kDaDNA 结合亚基 (RPA1) ELISA 试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗大鼠 RPA1 抗体。
结合:加入标准品或样本,RPA1 被固相抗体捕获。
检测:加入生物su化的抗大鼠 RPA1 抗体和 HRP 标记的亲和素,形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1.平衡试剂:试剂盒室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按比例稀释备用。
2.加样:设空白孔、标准品孔、样品孔,每孔加对应标准品 / 稀释后样本,封板温育。
3.温育反应:37℃孵育 30–60 min,完成抗原抗体结合。
4.洗板:弃液甩干,洗涤液注满每孔,浸泡后拍干,重复洗板3–5 次。
5.加酶结合物:除空白孔外,每孔加入 HRP 标记抗体,封板 37℃再次温育。
6.再次洗板:同上述洗板流程,洗净未结合游离酶标物。
7.显色:每孔先后加入 A、B 显色液,避光 37℃显色 10–15 min。
8.终止读数:加终止液终止反应,颜色由蓝变黄;立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。
9.结果计算:以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线,换算样本待测指标浓度。