产品简介：
本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆中的过敏毒素 / 补体片断 4a（C4a）含量。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于补体系统激活、过敏性疾病、炎症反应及自身免疫病研究等领域。
产品名称：大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)elisa试剂盒
英文名称：C4a ELISA Kit
产品规格：48T/96T
产品货号：CS-5848E
检测原理：
大鼠过敏毒素 / 补体片断 4a (C4a) ELISA 试剂盒的原理是竞争法，通过固相载体包被抗原，样本中抗原与固相抗原竞争结合特异性抗体，最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化：微孔板预先包被 C4a 人工抗原。
结合：加入标准品或样本与特异性抗体混合液，C4a 与固相抗原竞争结合抗体。
检测：加入 HRP 标记的二抗，与结合在固相载体上的抗体形成复合物。
显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成反比。
实验步骤：
1. 试剂回温至 20–25℃，稀释洗涤液、梯度配制标准品。
2. 每孔加 100μL 标准 / 样本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。
3. 加 HRP 抗体，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。
4. 加 TMB 避光显色 15min，加终止液混匀。
5. 450nm 快速测 OD 值，拟合曲线算浓度。
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操作步骤：
1、试剂与样本准备：
将试剂盒平衡至室温（20-25℃），按说明书稀释洗涤缓冲液（通常1:19）。
标准品：用梯度稀释至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列浓度。
样本：血清、血浆或组织匀浆上清。若t-PA浓度高，可按说明书（如1:10）稀释。
2、加样与孵育：
每孔加入100μL标准品或样本。
轻轻振荡混匀，避免触碰孔壁。
37℃孵育90分钟（部分试剂盒可能为120分钟，需以说明书为准）。
3、洗涤：
弃去孔内液体，用洗涤缓冲液加满每孔，静置30秒后甩干，重复5-6次。
4、加检测抗体与孵育：
每孔加入100μL化抗猪t-PA检测抗体。
37℃孵育60分钟。
5、再次洗涤：
同步骤3，洗去未结合抗体。
6、显色：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分钟。
7、终止与测定：
每孔加入50μL终止液，立即混匀（颜色由蓝变黄）。
在加终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度（OD值）。
