产品简介：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白浓度。检测范围覆盖0.313-20 ng/mL，灵敏度达0.16 ng/mL，适用于血管生成、肿瘤发展、缺血损伤修复及心血管疾病相关研究等领域。
产品名称：大鼠血管内皮细胞生长因子elisa试剂盒
英文名称：VEGF ELISA Kit
产品规格：48T/96T
产品货号：CS-5362E
检测原理：
大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)elisa试剂盒的原理是双抗体夹心法，通过固相载体捕获抗原，再用酶标记的检测抗体进行识别，最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化：微孔板预先包被抗大鼠VEGF抗体。
结合：加入标准品或样本，VEGF被固相抗体捕获。
检测：加入生物su化的抗大鼠VEGF抗体和HRP标记的亲和素，形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。
显色：加入TMB底物，被HRP催化后由蓝色变为黄色。
测定：用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与OD值成正比。
实验步骤：
试剂准备：将试剂盒平衡至室温(20-25℃)，洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。
洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。
加检测抗体：每孔加入100μL检测抗体-HRP，37℃孵育60分钟。
洗涤：同步骤3。
显色：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分钟。
终止：每孔加入50μL终止液，立即摇匀（颜色由蓝变黄）。
检测：450nm波长测定吸光度(OD值)，15分钟内完成。
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操作步骤：
1.试剂准备
将试剂盒平衡至室温（20-25℃），浓缩洗涤液按 1:20 稀释备用。
标准品按说明书进行梯度稀释，配制系列浓度标准曲线溶液。
2.实验流程
加样：设置空白孔、标准孔、待测样品孔，空白孔仅加稀释液，其余孔分别加入标准品或待测样品，37℃孵育。
加酶标抗体：除空白孔外，每孔加入酶标抗体，轻轻混匀，37℃避光孵育。
洗涤：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后甩干，重复洗涤 4-5 次，最后拍干残留液体。
显色：每孔加入 TMB 显色液，37℃避光孵育，孔内呈现蓝色。
终止：每孔加入终止液，混匀后颜色由蓝色转为黄色。
检测：在 450nm 波长下测定各孔 OD 值，15 分钟内完成读数。
3.关键提示
实验全程严格控温，孵育时使用封板膜避免蒸发。
洗涤需充分，否则易造成高背景、结果偏差。
显色液需避光，终止顺序与加样顺序保持一致，确保充分混匀。
