实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
肝癌细胞；Hep3B2.1-7 | 贴壁生长 | EY-X63560 |
细胞名称 肝癌细胞；Hep3B2.1-7
形态特性: 上皮细胞
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞系来自8岁男性黑人的组织。其染色体模式数目为60，在裸鼠中能致瘤。已知该细胞系含有与人类疾病有关的因子，需在2级生物安全防护下操作。
培养条件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)优质胎牛血清，10%
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况: P(154+5)
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
TenuibacillusRITA (NSC 652287)Human SMARCD2 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；IIB11拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae2-二环己膦基-2'-(N,N-二)-联苯Human SLTM ELISA Kit
小鼠杂交瘤；2D6C1C2C5拉丁属名: Pseudomonas mandelii2-二环己膦基-2'-(N,N-二)-联苯Human SLC6A8 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；2G9B9H6A2拉丁属名: Bacillus subtilis4-甲硫基苯Human SLC5A8 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；IIIF9拉丁属名: Caulobacter henricii4-甲硫基苯Human SLC38A3 ELISA Kit
抗人TATA box结合蛋白反应蛋白单抗杂交瘤；1E2D6拉丁属名: Ophiocordyceps sinensis(3aR,8aR)-(-)-(2,2-Dimethyl-4,4,8,8-tetraphenyl-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-e][1,3,2]dioxaphosphepin-6-yl)dimethylamine.Human SLC7A4 ELISA Kit
抗人磷脂酰肌蛋白聚糖前体蛋白单抗杂交瘤；3A11C7H4D5拉丁属名: Penicillium chrysogenum4-溴-3-氯苯Human SMAP1 ELISA Kit
抗人fusion单抗杂交瘤；1F4E6A2拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae4-溴-3-氯苯Human SMCR7/MID49 ELISA Kit
抗人BCS1-like小鼠杂交瘤；1C3C12A2拉丁属名: Streptomyces fulvoviolaceusa-葡糖-a-葡糖苷Human SMAP2 ELISA Kit
抗人微管a蛋白单抗杂交瘤；2C10D7B5B2拉丁属名: Sphaerisporangium viridialbum2'-O-甲基鸟苷Human LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3) ELISA Kit
抗NADH脱氢酶亚单位1单抗杂交瘤；LP-NADH-F11用途: 其中与山蚂蝗等豇豆属植物共生固氮2'-O-甲基鸟苷Human SMCHD1 ELISA Kit
抗P24蛋白单抗杂交瘤；8H1拉丁属名: septicum2'-甲氧基胞苷Human SMARCA4 ELISA Kit
抗GST蛋白单抗杂交瘤；4F10拉丁属名: Bacillus subtilis2'-甲氧基胞苷Human SMCR7L ELISA Kit
小鼠杂交瘤；2B10G10D10F7拉丁属名: Arthrobacter sp.3-溴代苯乙酮Human SMG5 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；3D2拉丁属名: Hannaella oryzae3-溴代苯乙酮Human SLC5A11 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；1F3拉丁属名: Vibrio natriegens3-溴代苯乙酮Human SMARCA5 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；1H8拉丁属名: Bacillus subtilis3-溴代苯乙酮Human SLN ELISA Kit
小鼠杂交瘤；1H6拉丁属名: Avian encephalomyetitis virus邻氯苯乙酮Human SMARCAL1 ELISA Kit
小鼠杂交瘤；IIIA3a用途: 药用邻氯苯乙酮Human SLC5A8
肝癌细胞；Hep3B2.1-7人布鲁氏菌抗体IgG(BrucellaAbIgG)ELISA试剂盒SLCELISAKit产品规格:48T/96T。
人囊虫病抗体(CYTAb)ELISA试剂盒SLEELISAKit产品规格:48T/96T。
人白喉抗体(DiphtheriaAb)ELISA试剂盒sLRELISAKit产品规格:48T/96T。
人阿米巴(Amebiasis)ELISA试剂盒sLRELISAKit产品规格:48T/96T。
人钩端螺旋体IgG(Lebtospira)ELISA试剂盒sLRELISAKit产品规格:48T/96T。
人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒smActinin-αELISAKit产品规格:48T/96T。
人破伤风抗体(TetanusAb)ELISA试剂盒smActinin-αELISAKit产品规格:48T/96T。
人旋毛虫抗体(TrichinellaAb)ELISA试剂盒smActinin-αELISAKit产品规格:48T/96T。
