实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
大鼠肺细胞;WTRL1 | 贴壁生长 | EY-X63756 |
细胞名称 大鼠肺细胞;WTRL1
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞系来源于一雄性大白鼠的肺组织。1984年由中国*昆明细胞库建立。
培养条件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
传代方法: 1:2传代;3-4天一次
传代情况: P3
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 荧光法(-)
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase *储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase*储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将*成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% *和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除*细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用*细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除*细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
2"-O-Glucosylrutin
CAS No.:55696-55-4
中文名:
分子式:C33H40O21
人绒毛膜*β亚 订购|咨询 腺苷合酶(ADSS) 规格: 240ng/0.5mL/支
醋可的松 订购|咨询 腺苷高半胱解酶(AHCY) 规格: 100mg
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2基5二(卓杂质I) 订购|咨询 腺苷裂解酶(ADSL) 规格: 50mg/支
哆辛(*6) 订购|咨询 腺苷环酶1(ADCY1) 规格: 100mg
泼松龙 订购|咨询 腺苷环酶10(ADCY10) 规格: 100mg
订购|咨询 腺苷环酶10(ADCY10) 规格: 100mg
金毛耳草(黄毛耳草) 订购|咨询 腺苷环酶2(ADCY2) 规格: 3g
5羟基糠醛 订购|咨询 腺苷环酶3(ADCY3) 规格: 10mg
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仑林 订购|咨询 腺苷环酶6(ADCY6) 规格: 100mg
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瓜子金 订购|咨询 腺苷激酶1(AK1) 规格: 1g
Factor VII light chain *VII 现货供应 0.2ml 3,5Dinitrosalicylic acid
Myosin VIIa/DFNB2 肌球蛋白7a/常染色体隐性耳聋蛋白2抗体 现货供应 0.2ml Sodium malonate
Factor X *10抗体 现货供应 0.2ml Sodium phosphate, monobasic, dihydrate
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丁酯标准品 规格:200mg 英文名称:Butamben
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大鼠肺细胞;WTRL1NaCl赖氨脱羧酶肉汤规格:20支详情介绍
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