实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
肝癌细胞；Li-7 | 贴壁生长 | EY-X63929 |
细胞名称 肝癌细胞；Li-7
形态特性: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 人肝癌细胞株。这株细胞从裸鼠体外移植瘤中建立。
培养条件: RPMI1640(w/oHepes)优质胎牛血清，10%
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况: PN5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
Anoctamin-1蛋白检测试剂盒细胞名称: Cas9稳定表达
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)轮环藤宁
β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4
脱落酸(标准品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯
脱落酸(高纯)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氢-2-萘
脱落酸,S-诱抗素; 壮芽灵TDP43 (A260) Antibody3,5-二羟基甲
(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三银
核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯
S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴甲酯
(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯试剂
蛋白酶K(进分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯
蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羟基甲
胰凝蛋白酶抑制剂CMTM6 Antibody2-溴-5-羟基甲
亮抑蛋白酶肽(进口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody异甲酯
胃酶抑素A;抑肽素;抑制剂MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯
岩藻糖；L-岩藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮盐酸盐
果胶酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯
β-(70万u/ml液体)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯盐酸盐
β-(酶活5万粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二
DNA酶,脱氧核糖核酸酶ⅠPhospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,5-二氟甲酸
高峰来源于米曲霉(4000U/g)1BB/CD137/TNFRSF9 (D2Z4Y) Rabbit mAb基*氧基硅烷
高峰来源于米曲霉(100U/mg )Phospho-FLT3 (Tyr591) Antibody2,2'-偶氮二异丁基脒
甘油-酸脱氢酶FLT3 (8F2) Rabbit mAb
Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAb2-氟磺酰
DL-对氨酸Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb辛酸亚锡
延胡素酸氨基酯Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb肼(无水)
辅羧酶;羧化辅酶;焦酸硫素Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb盐酸丁脒
吲哚酸酯Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAb硫酸盐
α-环糊精Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)哌-2-羧酸
氧化酶(XOD)Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAb3,二甲酰
酰化酶,L-氨基酰化酶Perilipin-1 (K117) Antibody2-氨基-N-(2--6-基)噻唑-5-甲酰
1:250eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAb2-氨基-5-溴噻唑
1:2500TrK (pan) (A7H6R) Rabbit mAb (Biotinylad)硝基咪唑
阿利多eIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb1-甲基-硝基咪唑
核糖核酸酶A(美仑)；RNase A;核糖核酸酶IeIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb5-溴噻唑
5‘-酸吡哆，一水Perilipin-1 (D418) Antibody2-咪唑
NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(罗氏)Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) Antibody2-(三氟甲基)基
；RBE-Cas9-784形态特性: 上皮样Calcium channel antibody
肝癌细胞；Li-7百蕊草素I40437-72-7中文别名：阿福豆苷；山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷；山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李 糖苷
英文名：Kaempferol-3-O-glucorhamnoside
CAS登录号：40437-72-7
分子式：C27H30O15
分子量：594.16
分子结构：
规格：20mg/支
纯度：≥ 98%
用途：用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源：檀香科多年生半寄生草本植物百蕊草Thesium chinense Turcz．的全草
药理药效：有抗菌消炎，清热解等作用。
贮存条件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
