实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
结直肠腺癌细胞；LoVo | 贴壁生长 | EY-X63324 |
细胞名称 结直肠腺癌细胞；LoVo
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞是1971年从诊断为结肠腺癌的56岁白人男性的一个左锁骨上区的转移灶建系的。癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb和fos的表达呈阳性；未检测到sis和N-myc的表达。它在裸鼠中能成瘤；表达肿瘤特异的核基质蛋白蛋白CC-3和CC-4。
培养条件: F12K10%FBS
传代方法: 1:3~1:10传代；2~3天换液1次。
传代情况: C3
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
小鼠杂交瘤细胞；AFG20081C8形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-GAS6 Polyclonal Antibody
羟基纤维素（4000mpas）RECK (D8C7) Rabbit mAb2-氟磺酰
麦芽糖;淀粉糖Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb2-磺酰
ONX-0914 (PR-957)Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb炔联
N-壬酰基-N-甲基葡萄糖(MEGA9)Flotillin-2 (C42A3) Rabbit mAb间异酸酯
甲基纤维素(100000mPa.s)AMPA Receptor 3 (GluA 3) Antibody2-(*硅基)
甲基纤维素(4000 mPa.s)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb三钠
对基-β-D-吡喃半糖苷(PNPG)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb2 , 二溴-5-甲基吡
D-核糖(标准品)Notch1 (C37C7) Rabbit mAb三氟磺酸银
D-核糖Chk2 (1C12) Mouse mAb三氟肼盐酸盐
二硫苏糖(DTT)Chk2 (1C12) Mouse mAb5-溴-2-氟
D(+)-松二糖Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjuga)氟肼盐酸
D-果糖-1,6-二酸三钠盐GOT1 (E4A4O) Rabbit mAb2-氟-甲基-5-溴吡啶
海带多糖；昆布糖 (来自褐藻类)S100A9 (D5O6O) Rabbit mAb (IHC Formulad)L-
(1:250)，粉Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb巯基酸甲酯
木瓜蛋白酶(800u/mg)Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb2-氨基-5-甲酸
木瓜蛋白酶(2000u/mg)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-
(1:2500)GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,二甲
(1:4500)Notch3 (8G5) Rat mAb2-巯基-5-甲基-1,3,噻二唑
态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-SERPINB5 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞；AC-G10形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-β-Tubulin Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞；AC-H12形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-TLR3 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞；WXR形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-PRKAA1 Polyclonal Antibody
结直肠腺癌细胞；LoVo大鼠糖皮质激素受体β(GR-β)ELISA试剂盒ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠同型半胱氨(Hcy)ELISA试剂盒EM-2ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠αS转移酶(α-GST)ELISA试剂盒EMAbELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠C型钠尿肽(P)ELISA试剂盒EMAbELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)ELISA试剂盒EMAbELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠(HYD)ELISA试剂盒EMAbELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠(Pepsin)ELISA试剂盒EMAELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA试剂盒EMAIgAELISAKit产品规格:48T/96T。
