实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
山羊肾上皮样细胞;DG-K1 | 贴壁生长 | EY-X63893 |
细胞名称 山羊肾上皮样细胞;DG-K1
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞系来源于一雄性山羊的肾组织,2010年由中科院昆明细胞库建立。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法: 1:2传代;3-4天一次
传代情况: P3
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 荧光法(-)
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
脂氧合酶同工酶1检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;WSSV-K1形态特性: 淋巴母细胞样LOX-1
脂氧合酶同工酶2检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;WSSV-K2形态特性: 淋巴母细胞样LOX-2
脂氧合酶同工酶3检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;Ss-IgM形态特性: 淋巴母细胞样LOX-3
脂氧合酶同工酶4检测试剂盒细胞名称: 胃癌耐药细胞株;BGC823/形态特性: 上皮样LOX-4
CD56分子检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;MCM1形态特性: 淋巴母细胞样Cluster of differentiation 56
转酶检测试剂盒细胞名称: 肝癌细胞株;LM3形态特性: 上皮样transglutaminase
酪蛋白α检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;LCZ4H3形态特性: 淋巴母细胞样Casein Alpha
Ⅹ组磷脂酶A2检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;Sm-IgM形态特性: 淋巴母细胞样Phospholipase A2, Group X
甘露聚糖结合凝集素丝氨肽酶-3检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;LCZ2A6形态特性: 淋巴母细胞样Mannose Associated Serine Protease 3
肌醇3磷合成酶检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;7G4.3形态特性: 淋巴母细胞样Ins(3)P1 synthase
类粘蛋白1检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;11-1形态特性: 淋巴母细胞样Alpha-1-acid glycoprotein 1
SPARC相关模块化钙结合蛋白1检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;4E11形态特性: 淋巴母细胞样SPARC-related modular calcium-binding protein 1
梅迪-维斯纳病检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;5D5形态特性: 淋巴母细胞样Maedi-Visna Disease
铁结合蛋白检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;5C8H5形态特性: 淋巴母细胞样Iron-binding proteins
去酰氨基麦醇溶蛋白抗体检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;6G8形态特性: 淋巴母细胞样DGP-Ab
细胞色素氧化酶2C9检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;mAbD7形态特性: 淋巴母细胞样Cytochrome oxidase 2C9
蛋白酪氨磷酶K检测试剂盒细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞株;N2D1形态特性: 淋巴母细胞样Protein tyrosine phosphatase K
山羊肾上皮样细胞;DG-K1小白菊内酯20554-84-1英文名:Parthenolide
英文别名:2,3,6,7,7a,8,10a,10b-Octahydro-1a,5-dimethyl-8-methyleneoxireno(9,10)cyclodeca(1,2-b)furan-9(1aH)-one;Parthenolide;4Xi-germacra-1(10),11(13)-dien-12-oic acid, 4,5-epoxy-6.alpha.-hydroxy-, gamma-lactone;Oxireno(9,10)cyclodeca(1,2-B)furan-9(1ah)-one, 2,3,6,7,7A,8,10A,10B-octahydro-1A,5-dimethyl-8-methylene-;Parthenlide
CAS登录号:20554-84-1
分子式:C15H20O3
分子量:248.32
分子结构:
外观:棕黄色粉末
规格:20 mg/支
纯度:≥ 98%
用途:用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源:木兰科观光木属植物宿轴木兰(Tsoongiodendronodorum Chun)
溶解性:溶于、、DMSO等有机溶剂,不溶于水。
熔点:115 °C
药理药效:主要用于治疗皮肤感染、风湿病和偏头疼,并能使肿瘤细胞发生细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。
贮存条件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年