产品简介：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的白介素 35（IL-35）蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于免疫耐受、抗炎调控、自身免疫病及肿瘤免疫研究等领域。
产品名称：大鼠白介素35(IL-35)elisa试剂盒
英文名称：IL-35 ELISA Kit
产品规格：48T/96T
产品货号：CS-6073E
检测原理：
大鼠白介素 35 (IL-35) ELISA 试剂盒的原理是双抗体夹心法，通过固相载体捕获抗原，再用酶标记的检测抗体进行识别，最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化：微孔板预先包被抗大鼠 IL-35 抗体。
结合：加入标准品或样本，IL-35 被固相抗体捕获。
检测：加入生物su化的抗大鼠 IL-35 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。
显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。
实验步骤：
1.试剂提前室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔，精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应，结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗，重复洗板 3–5 次，去除未结合杂质。
5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶结合物，再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体，保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色，待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应，颜色由蓝转黄，即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算，得出样本目标物质浓度。
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操作步骤：
1、试剂与样本准备：
将试剂盒平衡至室温（20-25℃），按说明书稀释洗涤缓冲液（通常1:19）。
标准品：用梯度稀释至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列浓度。
样本：血清、血浆或组织匀浆上清。若t-PA浓度高，可按说明书（如1:10）稀释。
2、加样与孵育：
每孔加入100μL标准品或样本。
轻轻振荡混匀，避免触碰孔壁。
37℃孵育90分钟（部分试剂盒可能为120分钟，需以说明书为准）。
3、洗涤：
弃去孔内液体，用洗涤缓冲液加满每孔，静置30秒后甩干，重复5-6次。
4、加检测抗体与孵育：
每孔加入100μL化抗猪t-PA检测抗体。
37℃孵育60分钟。
5、再次洗涤：
同步骤3，洗去未结合抗体。
6、显色：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分钟。
7、终止与测定：
每孔加入50μL终止液，立即混匀（颜色由蓝变黄）。
在加终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度（OD值）。
