实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
羊膜细胞；WISH | 贴壁生长 | EY-X63267 |
细胞名称 羊膜细胞；WISH
形态特性: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 最初以为这株细胞的起源是正常羊膜，但随后通过同工酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹法分析，证实该细胞是HeLa细胞污染的；角蛋白阳性。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法: 1:2~1:10传代；每周换液2次。
传代情况: P180
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
小鼠腹水瘤细胞；EAC-E2G8形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Porcine CCL4/MIP-1β Elisa Kit
锌原卟啉NSF (D31C7) XP® Rabbit mAb2-溴丁酸酯
美伐他汀,康百汀SNAP25 (D110) Antibody(S)-1-溴-2-甲基丁烷
美伐他汀(标准品)PKA RI-α/β Antibody1,2-戊二
6-氨基青霉烷酸PhosphoPlus® Syk (Tyr525/526) Antibody Duet溴-甲
L-天门冬酰酶,门冬酰酶Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Biotinylad)-甲氧基
2,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠(BCA)CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb10-溴-1-癸
魏因勒卜链接剂,N-芴甲氧羰基-N-甲氧基-氨基酸CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb(溴酰基)吡啶盐
N-Fmoc-D-1,2,3,四氢异喹啉-羧酸Rab3A Antibody2-氟-5-三氟
N-苄氧羰基-L-氨酸SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)(S)-羟基丁酸甲酯
N-苄氧羰基-L-谷氨酰Vimentin (R28) Antibody2-噻吩-5-磺酰
N-CBZ-L-氨酸Ubiquitin Antibody甲基磺酰苄溴
盐酸美卡因PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbalpha-溴代-酮
N-苄氧羰基-L-Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAb2-溴-甲酸
N-苄氧羰基-L-Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAb异基甲酸
N-CBZ-beta-氨酸HMGB1 Antibody氨基-5-吡唑
CBZ-D-α-苄酯Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb基吡啶
N-苄氧羰基-L-Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb环基-氧代丁酸,95%
Z-L-甲酯CYR61 (E5W3H) Rabbit mAb7-溴-1H-吲唑
钠Hemoglobin γ (D4K7X) Rabbit mAb基富马酸
CBZ-D-FoxO3a (75D8) Rabbit mAb (Biotinylad)L-beta-高盐酸盐
Z-Arg(Mtr)-OH·CHAPhospho-Stat5 (Tyr694) (C71E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)6-溴藜芦
CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐;N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸甲酯盐酸盐PathScan® Total Tyro3 Sandwich ELISA Kit柠檬
N-CBZ-D-氨酸Phospho-SHIP1 (Tyr1020) Antibody(溴基)二甲基
BOC-L-氨酸DUSP6/MKP3 Antibody对肼
BOC-L-氨酸Abi1 (D3G6C) Rabbit mAb戊酸酯
BOC-Neogenin (D7M8E) Rabbit mAb2-氨基噻唑-甲酸酯
BOC-L-异Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,6-二异
BOC-L-Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (Biotinylad)对甲砜基甲
BOC-L-HDAC3 (7G6C5) Mouse mAb-1H-吡唑并[3,d]嘧啶
BOC-L-天冬氨酸HDAC3 (7G6C5) Mouse mAb三氟磺酸锌
BOC-L-SOCS1 (A156) Antibody1,二氟
BOC-L-SOCS1 (A156) Antibody酚
N-叔丁氧羰基-L-MST2 Antibody1-烷
BOC-L-MST2 Antibody氨基炔
BOC-L-HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)2-氨基-5--硝基吡啶
BOC-L-天冬酰Phospho-MEK1/2 (Ser217/221) (41G9) Rabbit mAb (Biotinylad)二酸二叔丁酯
特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Porcine TLR9 Elisa Kit
羊膜细胞；WISH小鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒BKELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒BKELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒BLC-1ELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒BLIELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒BLIELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白介素9(IL-9)ELISA试剂盒BLNKELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒BMG/β2-MGELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒BMP-2ELISAKit产品规格:48T/96T。
