细胞名称 小鼠胚胎细胞;SC-1
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性:
培养条件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清,10%
传代方法: 1:2-1:6
传代情况: P74
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
产品名称 | 小鼠胚胎细胞;SC-1 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63453 |
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
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rrCRP (200 UG)细胞名称: 人外周血B淋巴细胞;IM-9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrTF, CF (50 UG)细胞名称: 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92MI[NK92MI] α-MEM:AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)马血清,12.5%;优质胎牛血清,12.5%
rrTF, CF (10 UG)细胞名称: 人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1
rrTF Ra, CF (50 UG)细胞名称: 人肺癌细胞;TKB-1
rrTF Ra (50 UG)细胞名称: 人胚肺成纤维细胞;WI-38[WI38] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rrTF (50 UG)细胞名称: 非洲绿猴肾细胞;GL-37
rrTF (10 UG)细胞名称: 人肝癌细胞;HHCC DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rrCCL27/CTACK, CF (25 UG)细胞名称: 人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810[HFT8810] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rrCCL27/CTACK (25 UG)细胞名称: 人肝癌细胞;HB611 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rrCCL20/MIP-3a, CF (25 UG)细胞名称: 小鼠白血病细胞;P388 RPMI1640(w/oHepes)马血清,10%
rrCCL20/MIP-3a (25 UG)细胞名称: 人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染);ECV-304[ECV304;ECV304]
rrCCL2/JE, CF (25 UG)细胞名称: 牛肾细胞;MDBK(NBL-1) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rrCCL2/JE (25 UG)细胞名称: 人肝癌细胞;PLC/PRF/5 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)优质胎牛血清,10%
rrbTNF-a, CF (25 UG)细胞名称: 牛陀螺状细胞;BT DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%HS
rrbTNF-a (25 UG)细胞名称: 恒河猴肾细胞;LLC-MK2
rrBOK Western Blot Std (1 VL)细胞名称: 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞;RD DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
小鼠胚胎细胞;SC-1人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA试剂盒LIFELISAkit产品规格:48T/96T。
人α甘露糖苷酶(αManase)ELISA试剂盒LIFRELISAKit产品规格:48T/96T。
人α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA试剂盒LIFRELISAKit产品规格:48T/96T。
人α羟基丁脱氢酶(αHBDH)ELISA试剂盒LIFRELISAKit产品规格:48T/96T。
人α半乳糖基抗体(Gal)ELISA试剂盒LIFRELISAKit产品规格:48T/96T。
人β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidaseA)ELISA试剂盒LIFRELISAKit产品规格:48T/96T。
人β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒LKMELISAKit产品规格:48T/96T。
人β甘露糖苷酶(βManase)ELISA试剂盒LMAELISAKit产品规格:48T/96T。