实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
急性髓性白血病细胞;KG-1a | 贴壁生长 | EY-X63456 |
细胞名称 急性髓性白血病细胞;KG-1a
形态特性: 骨髓瘤细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性:
培养条件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清,20%
传代方法: 2x10-5细胞/ml
传代情况:
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
rpIFN-g (50 UG)细胞名称: 小鼠胚胎成纤维细胞;PA317 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清,10%
rpIFN-a (100000 UN)细胞名称: 小鼠结缔组织L细胞株929克隆;L-929[L929] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)马血清,10%
rPhos TrkA Cell-Based ELISA (1 KT)细胞名称: 小鼠B淋巴细胞;WEHI231 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,10%;0.05mMβ-巯基乙醇
rPhos TH Aff Pur PAb (100 UL)细胞名称: 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14;MC3T3-E1Subclone14 α-MEM:AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)优质胎牛血清,10%
rphHeparinase III, CF (10 UG)细胞名称: 小鼠颅盖成纤维细胞;OP9 α-MEM:AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)优质胎牛血清,20%
rphHeparinase II, CF细胞名称: 小鼠胚胎干细胞;ES-D3(CRL-1934) 干细胞培养基
rpGM-CSF, CF (10 UG)细胞名称: 小鼠肾上腺皮质细胞;Y1 优质胎牛血清,10%
rpGM-CSF (10 UG)细胞名称: 小鼠胚胎成纤维细胞;C3H/10T1/2,Clone8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)优质胎牛血清,10%
rpEndoglin, CF (25 UG)细胞名称: SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
rPDGF-AA MAb (Cl 184805) (500 UG)细胞名称: 牛胚气管细胞;EBTr(NBL-4) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清,10%
rPDGF-AA Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 恒河猴肾细胞;LLC-MK2 RPMI1640(w/oHepes)优质胎牛血清,10%
rPDGF-AA Aff Pur PAb (100 UG)细胞名称: 牛肾细胞;MDBK RPMI1640(w/oHepes)优质胎牛血清,10%
rpCD31 (PECAM-1), CF (50 UG)细胞名称: EB病转化的绒猴淋巴细胞;B95-8 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
rPBEF Aff Pur PAb细胞名称: 非洲绿猴肾细胞;VERO MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清,10%
rNXRN1b Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞;RF/6A RPMI1640(w/oHepes)优质胎牛血清,10%
rNXRN1b Aff Pur PAb (100 UG)细胞名称: 非洲绿猴肾细胞;CV-1 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
急性髓性白血病细胞;KG-1a人硫角质素(KS)ELISA试剂盒Lp-PL-A2ELISAKit产品规格:48T/96T。
人硫类肝素(HS)ELISA试剂盒Lp-PL-A2ELISAKit产品规格:48T/96T。
人硫皮肤素(DS)ELISA试剂盒LPSELISAKit产品规格:48T/96T。
人硫软骨素(CS)ELISA试剂盒Lptn/LTNELISAKit产品规格:48T/96T。
人尿游离(UFC)ELISA试剂盒Lptn/LTNELISAKit产品规格:48T/96T。
人葡萄糖6磷异构酶(GPI)ELISA试剂盒Lptn/LTNELISAKit产品规格:48T/96T。
人前列环素(PGI)ELISA试剂盒Lp-αELISAKit产品规格:48T/96T。
人鞘磷脂(SM)ELISA试剂盒Lp-αELISAKit产品规格:48T/96T。