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产品展示   ProductsATCC细胞>>转化细胞>>小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)
 
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产品名称:
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)
产品型号:
产品报价:
1360
产品特点:
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  小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)的详细资料:

公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:

产品名称

生长特性

货号

小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)

贴壁生长

EY-X63458

细胞名称  小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)
形态特性: 成纤维细胞样

生长特性: 贴壁生长

特征特性: 该细胞株为BrdU抵抗和TK缺陷株,对HAT敏感。

培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%

传代方法: 1:4~1:8

传代情况:

冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS

支原体检测: 培养法(-)

冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
rNLGN1 Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 大鼠肝细胞;BRL DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清,10%

rNLGN1 Aff Pur PAb (100 UG)细胞名称: 大鼠肝细胞;BRL3A DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,10%

rNeuropilin-2 MAb (Cl 96009) (500 UG)细胞名称: 大鼠骨骼肌成肌细胞;L6 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,10%

rNeuropilin-2 Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1) DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,10%

rNeuropilin-2 Aff Pur PAb (100 UG)细胞名称: 大鼠胸大动脉平滑肌细胞;A7r5

rNestin PE MAb (307501) (100 TESTS)细胞名称: 正常大鼠肾细胞;NRK-52E DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,5%

rNestin NL557 MAb (Cl 307501) (0.5 ML)细胞名称: 大鼠肺泡巨噬细胞;NR8383 F12K优质胎牛血清,20%

rNestin MAb (Cl 307501) (100 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗人单核细胞);4F2C13 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rNestin Biot Aff Pur PAb (50 UG)细胞名称: 大鼠雪旺细胞;RSC96 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)优质胎牛血清,10%

rNestin Aff Pur PAb (100 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠CD25);7G7B6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmXCL1/Lptn, CF (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗人肝癌);5HA10E5G8E1D10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmXCL1/Lptn (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗人CD8);51.1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmWnt-9b, CF (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗人促红细胞生成素);BF-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmWnt-9b (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗SAP);CY12.14 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmWnt-5b, CF (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗IX因子);Hyb133-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmWnt-5b (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞(抗CEA);1116NS-3d RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)人脂磷壁(LTA)ELISA试剂盒LRPELISAKit产品规格:48T/96T。

人游离原卟啉(FEP)ELISA试剂盒L-SelectinELISAkit产品规格:48T/96T。

6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒LSELISAKit产品规格:48T/96T。

β-促脂素(β-LPH)ELISA试剂盒LSPELISAKit产品规格:48T/96T。

人胆乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒LTAELISAKit产品规格:48T/96T。

人多巴胺-β羟化酶(DBH)ELISA试剂盒LTAELISAKit产品规格:48T/96T。

人多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒LTAELISAKit产品规格:48T/96T。

人非神经元性烯醇化酶(NNE)ELISA试剂盒LT-B4ELISAKit产品规格:48T/96T。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。

 

产品相关关键字: 小鼠结缔组织细胞 胸苷激酶缺陷株 L-M(TK-)
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