本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠细胞核、组织匀浆、细胞裂解液中的 HIF-1α 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于缺氧应答、糖酵解、血管生成、缺血再灌注及肿瘤低氧微环境研究。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 HIF-1α 抗体。

结合：加入标准品或样本，HIF-1α 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 HIF-1α 抗体和 HRP 标记亲和素，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，离心分离，-20℃分装，禁反复冻融。

2. 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝，慎用肝素，离心取上清。

3. 细胞上清：离心除杂质，-80℃保存。

4. 组织匀浆：冰上匀浆、高速离心取上清低温储存。

5. 禁忌：勿加叠氮钠抑制 HRP；拒收污染溶血样本，建议复孔检测。

操作步骤：

关键实操技巧

1.加样技巧

一次性换新枪头，垂直贴孔壁低位加液；避免气泡、飞溅交叉污染；整板加样速度均匀统一。

2.温育控温

须37℃恒温、封板膜严实防蒸发冷凝；时间严格卡死，过长背景高、过短信号低。

3.洗板核心

每孔注满不溢出，浸泡≥30 s；拍干用无尘吸水纸，杜绝残留；洗板不足直接高背景、假阳性。

4.样本规范

杜溶血、脂浊、污染样本；禁止反复冻融；严禁含 NaN₃抑制 HRP 活性；浓度超标只用试剂盒配套稀释液。

5.显色与读数

全避光；整板显色时长一致；加终止液立刻读数，放置越久数值漂移越大。

6.基础质控

样本、标准均做复孔；室温洁净避光操作；试剂分装取用，减少反复开盖失效。

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