细胞名称 肺癌细胞;H1299
形态特性: 上皮样细胞
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 这株细胞来源于一个淋巴结转移。患者接受了初期放疗。细胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表达。细胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液释放肽(GRP)。
培养条件: RPMI1640(w/oHepes)优质胎牛血清,10%
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况:
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
产品名称 | 肺癌细胞;H1299 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63461 |
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
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rmVCAM-1/Fc, CF (200 UG)细胞名称:
硝酸铈铵Phospho-Stathmin (Ser38) (D19H10) Rabbit mAb喹啉
盐酸萘二Phospho-Stathmin (Ser38) (D19H10) Rabbit mAb异丁酰
副品红,付玫瑰Cripto (D81B12) Rabbit mAb ( Specific)甲酰甲酸
吲哚酸(IAA)Sox1 Antibody顺式-1,2-二羟甲基
(标准品)Sox2 (L73B4) Mouse mAb巴豆
SignalSlide® Mouse PD-L1 IHC Controls1-基-1-环羧酸
托法替尼;CP-690550LIN28B Antibody邻二甲
1-萘酸(NAA);α-萘酸PSMD14 (D18C7) Rabbit mAb2-硝基苄
变色酸2RIL-2Rβ Antibody2-甲
2,二氧酸Cleaved Caspase-1 (Asp297) (D57A2) Rabbit mAb6-喹啉
钼酸Cleaved Caspase-1 (Asp297) (D57A2) Rabbit mAb甲基喹啉
磺酸;对氨基磺酸Rig-I (D33H10) Rabbit mAb7-甲基喹啉
p75NTR (D8A8) Rabbit mAb(氨基磺酰基)酸
(Sigma)Insulin/IGF-1 Signaling Pathway Antibody Sampler Kit酰
L-(标准品)YB1 (D299) Antibody2-氨基酮
DL-苦杏仁酸Eg5 (4H1F12) Mouse mAb甲酰
抗坏血酸;FastScan™ Phospho-CREB (Ser133) ELISA Kit丁缩二
(标准品)NMDA Receptor 2A (GluN2A) Antibody2-喹唑啉
吲哚丁酸(IBA)Phospho-NMDA Receptor 2A (GluN2A) (Tyr1246) Antibody酯
十八; 十八烷基; 硬脂ABCG2 (D5V2K) XP® Rabbit mAb5-降冰-2-基酸酯
山梨酸ABCG2 (D5V2K) XP® Rabbit mAb
对羟基甲酸(标准品)NMDA Receptor 2B (GluN2B) Antibody过氧化甲酸叔丁酯
对羟基甲酸EZH1 (D7D5D) Rabbit mAb5-并咪唑
卢立康唑Phospho-NMDA Receptor 2B (GluN2B) (Tyr1472) Antibody2-并咪唑
酸Phospho-NMDA Receptor 2B (GluN2B) (Tyr1070) Antibody2-并恶唑
亚硝酸钴钠Phospho-Estrogen Receptor α (Ser167) (D5W3Z) Rabbit mAb (ChIP Formulad)草酸
酮酸钠Phospho-RCC1 (Ser11) Antibody1--2-
5-硝基-1,10-菲咯啉;5-硝基邻菲啰啉Parkin (Prk8) Mouse mAb2-
亚硝基铁化钠Parkin (Prk8) Mouse mAb2,二溴酚
铁冬青酸(标准品)NMDA Receptor 2B (GluN2B) (D15B3) Rabbit mAb2--
溴酚蓝钠Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjuga)2-溴己酸酯
百里香酚兰钠Clusrin (D4B6P) Rabbit mAb头孢替安
四钠FastScan™ Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) ELISA Kit氨基-1,2-
磺基USP28 Antibody2-噻吩酸
亚硝基红盐USP28 Antibody噻吩酸
玫瑰红酸钠LSD1 (1E5-H2) Mouse mAb异频哪酸酯
转移卵巢癌细胞;HO-8910PM RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
肺癌细胞;H1299人Na+/H+交换体3(NHE3)ELISA试剂盒LTF/LFELISAkit产品规格:48T/96T。
人鸟氨氨基甲酰转移酶(OCT)ELISA试剂盒LXA4ELISAKit产品规格:48T/96T。
人肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)ELISA试剂盒lymphocytefactorELISAKit产品规格:48T/96T。
人脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒LZMELISAKit产品规格:48T/96T。
人基膜聚糖(lumican)ELISA试剂盒M2-PKELISAKit产品规格:48T/96T。
人蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)ELISA试剂盒M2-PKELISAKit产品规格:48T/96T。
人蛋白二硫化物异构酶前体(PDI)ELISA试剂盒M2-PKELISAKit产品规格:48T/96T。
人2,3-二磷甘油(2,3-DPG)ELISA试剂盒M30ELISAKit产品规格:48T/96T。