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产品名称 | 小鼠成纤维细胞;φ2 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63248 |
细胞名称 小鼠成纤维细胞;φ2
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性:
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%CS
传代方法: 1:6传代;2~3天1次。
传代情况: C5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
人喉癌上皮细胞;Hep-2形态特性: 上皮细胞生长特性: 贴壁生长Human Dkk-3 ELISA KIT
人卵巢癌细胞;HO-8910形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Rabbit Serpin F2/alpha-2-antiplasmin ELISA Kit
人食管癌细胞;JAR形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Mouse Fetuin A ELISA KIT
人慢性髓系白血病细胞;K562形态特性: 淋巴母细胞样;圆形生长特性: 悬浮生长Human Dkk-1 ELISA KIT
人T淋巴细胞白血病细胞;HuT78形态特性: 淋巴母细胞生长特性: 悬浮生长Sheep Serpin E1/PAI-1 ELISA Kit
人前列腺癌细胞;LNCaPcloneFGC[LNCaP.FGC]形态特性: 上皮样;梭形生长特性: 贴壁生长Human Leptin R ELISA KIT
人结直肠腺癌细胞;LS174T[LS174T]形态特性: 上皮细胞生长特性: 贴壁生长Bovine MMP-9 ELISA Kit
人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移);KP-N-NS形态特性: 其他生长特性: 贴壁生长Human FLRG ELISA KIT
人肺腺癌细胞;Lu-165形态特性: 上皮样细胞生长特性: 贴壁生长Human β-NGF ELISA KIT
人癌细胞;MDA-MB-453形态特性: 上皮细胞样生长特性: 半贴壁生长Human u-Plasminogen Activator ELISA KIT
人肺腺癌细胞;LTEP-a-2形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长 Mouse IGFBP-5 ELISA KIT
人癌细胞;MDA-MB-435S形态特性: 纺锤形生长特性: 贴壁生长Feline CCL4/MIP-1b ELISA Kit
人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4形态特性: 淋巴母细胞生长特性: 悬浮生长Canine (dog) BMP2 ELISA Kit
人小细胞肺癌细胞;NCI-H446形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁/悬浮生长,混合Canine (dog) CCL4/MIP-1 beta ELISA Kit
人大细胞肺癌细胞;NCI-H460[H460]形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human REG1B ELISA KIT
人肾癌细胞;OS-RC-2形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Human PLGF ELISA KIT
小鼠成纤维细胞;φ2小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒APCRELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒APELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒APFELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠抗(AT)ELISA试剂盒Apl/APAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒ApoA1ELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒apo-A1ELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠碳酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒apo-A1ELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒apo-A1ELISAKit产品规格:48T/96T。