本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠细胞、组织匀浆、血清中的泛素蛋白水平。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于蛋白泛素化、蛋白酶体降解、细胞应激、衰老及神经退行性疾病研究。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 Ub 抗体。

结合：加入标准品或样本，Ub 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 Ub 抗体和 HRP 标记亲和素，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本处理

1) 血清：无菌无热源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 离心 10 min 取上清，-20℃分装，禁反复冻融。

2) 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝（慎用肝素），离心分离上清。

3) 细胞上清：1000×g 离心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 组织匀浆：预冷 PBS / 生理盐水冰上匀浆，高速离心取清亮上清低温保存。

2. 通用注意

严禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜绝溶血、浑浊、污染样本；全程低温防降解；超标样本用试剂盒专用稀释液稀释，实验建议设置复孔。

操作步骤：

1. 试剂回温至 20–25℃，稀释洗涤液、梯度配制标准品。

2. 每孔加 100μL 标准 / 样本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。

3. 加 HRP 抗体，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。

4. 加 TMB 避光显色 15min，加终止液混匀。

5. 450nm 快速测 OD 值，拟合曲线算浓度。

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