本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织匀浆中的 SP-B 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于肺泡表面活性功能、新生儿呼吸窘迫模型、肺损伤修复研究。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 SP-B 抗体。

结合：加入标准品或样本，SP-B 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 SP-B 抗体和 HRP 标记亲和素，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，离心分离，-20℃分装，禁反复冻融。

2. 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝，慎用肝素，离心取上清。

3. 细胞上清：离心除杂质，-80℃保存。

4. 组织匀浆：冰上匀浆、高速离心取上清低温储存。

5. 禁忌：勿加叠氮钠抑制 HRP；拒收污染溶血样本，建议复孔检测。

操作步骤：

1.平衡试剂：试剂盒室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按比例稀释备用。

2.加样：设空白孔、标准品孔、样品孔，每孔加对应标准品 / 稀释后样本，封板温育。

3.温育反应：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗体结合。

4.洗板：弃液甩干，洗涤液注满每孔，浸泡后拍干，重复洗板3–5 次。

5.加酶结合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 标记抗体，封板 37℃再次温育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗净未结合游离酶标物。

7.显色：每孔先后加入 A、B 显色液，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数：加终止液终止反应，颜色由蓝变黄；立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。

9.结果计算：以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线，换算样本待测指标浓度。

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