本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠细胞核、组织匀浆、细胞裂解液中的 ARNTL 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于生物钟调控、昼夜节律、代谢节律及转录调控研究。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 ARNTL 抗体。

结合：加入标准品或样本，ARNTL 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 ARNTL 抗体和 HRP 标记亲和素，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

血清：无热源无菌采血管采集，杜绝溶血、脂血污染；1000×g 离心 10 min 分离上清，-20℃分装保存，严禁反复冻融。血浆：选用 EDTA / 柠檬酸盐 / 肝素抗凝管采血混匀，离心去除血细胞取上清备用（部分试剂盒慎用肝素）。细胞上清：收集后 1000×g 离心 10 min 去除细胞碎片与杂质，-70~-80℃低温保存。组织匀浆：预冷生理盐水 / PBS 冰上制备匀浆，高速离心取澄清上清，-20℃避光分装贮存。

2. 通用注意事项

1) 样本严禁添加叠氮钠（NaN₃），会抑制 HRP 酶活性，导致显色失效。

2) 所有样本避免室温久置，全程低温操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、浑浊、微生物污染样本直接废弃，干扰抗体抗原结合。

4) 细胞上清、低丰度指标样本务必设置复孔，校正实验误差。

5) 检测浓度超标时，仅用试剂盒配套稀释液稀释，匹配基质体系。

操作步骤：

1.试剂平衡试剂盒室温平衡 30 min；浓缩洗涤液按说明书稀释混匀。

2.设孔加样设空白、标准品、待测样品孔，精准加样，封板。

3.温育结合37℃孵育 30–60 min，弃液拍干。

4.洗板加满洗涤液浸泡，甩干拍干，重复3–5 次。

5.加酶结合物除空白孔外每孔加 HRP 标记液，封板 37℃孵育。

6.再次洗板充分洗净未结合游离酶，控干残留液体。

7.显色避光加显色液 A/B，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数加终止液变色稳定后，立刻酶标仪读 OD 值。

9.结果计算标准曲线拟合，换算样本浓度。

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