本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠黏膜液、唾液、肠灌洗液、呼吸道分泌物、血清中的 sIgA 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于黏膜免疫屏障、局部抗感染免疫、肠道及呼吸道免疫功能评价研究。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 sIgA 抗体。

结合：加入标准品或样本，sIgA 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 sIgA 抗体和 HRP 标记亲和素，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，离心分离，-20℃分装，禁反复冻融。

2. 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝，慎用肝素，离心取上清。

3. 细胞上清：离心除杂质，-80℃保存。

4. 组织匀浆：冰上匀浆、高速离心取上清低温储存。

5. 禁忌：勿加叠氮钠抑制 HRP；拒收污染溶血样本，建议复孔检测。

操作步骤：

1.试剂提前室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按说明书稀释配制。

2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔，精准加样后封板。

3.37℃恒温孵育结合反应，结束后弃孔内液体拍干。

4.加满洗涤液浸泡清洗，重复洗板 3–5 次，去除未结合杂质。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶结合物，再次 37℃温育。

6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体，保证背景干净。

7.依次加入显色液避光显色，待梯度蓝色清晰显现。

8.加入终止液终止反应，颜色由蓝转黄，即刻用酶标仪读取 OD 值。

9.根据标准曲线拟合计算，得出样本目标物质浓度。

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