本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的铜蓝蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于铜离子转运、铁氧化代谢、抗氧化防御及肝豆状核变性相关研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 CP 抗体。

结合：加入标准品或样本，CP 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 CP 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

血清：无热源无菌采血管采集，杜绝溶血、脂血污染；1000×g 离心 10 min 分离上清，-20℃分装保存，严禁反复冻融。血浆：选用 EDTA / 柠檬酸盐 / 肝素抗凝管采血混匀，离心去除血细胞取上清备用（部分试剂盒慎用肝素）。细胞上清：收集后 1000×g 离心 10 min 去除细胞碎片与杂质，-70~-80℃低温保存。组织匀浆：预冷生理盐水 / PBS 冰上制备匀浆，高速离心取澄清上清，-20℃避光分装贮存。

2. 通用注意事项

1) 样本严禁添加叠氮钠（NaN₃），会抑制 HRP 酶活性，导致显色失效。

2) 所有样本避免室温久置，全程低温操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、浑浊、微生物污染样本直接废弃，干扰抗体抗原结合。

4) 细胞上清、低丰度指标样本务必设置复孔，校正实验误差。

5) 检测浓度超标时，仅用试剂盒配套稀释液稀释，匹配基质体系。

操作步骤：

1.平衡试剂：试剂盒室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按比例稀释备用。

2.加样：设空白孔、标准品孔、样品孔，每孔加对应标准品 / 稀释后样本，封板温育。

3.温育反应：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗体结合。

4.洗板：弃液甩干，洗涤液注满每孔，浸泡后拍干，重复洗板3–5 次。

5.加酶结合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 标记抗体，封板 37℃再次温育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗净未结合游离酶标物。

7.显色：每孔先后加入 A、B 显色液，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数：加终止液终止反应，颜色由蓝变黄；立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。

9.结果计算：以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线，换算样本待测指标浓度。

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