实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：

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细胞名称  神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17
形态特性: 神经母细胞样

生长特性: 贴壁生长

特征特性: 该细胞系源自一位2岁患有神经母细胞瘤男童的骨髓，是SK-N-BE(2)神经母细胞瘤的一个；细胞多层生长，随着培养时间细胞会聚集、漂浮。

培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

传代方法: 1:20~1:50传代；每4~7天换液1次。

传代情况: C5

冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS

支原体检测: 培养法（-）
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的  *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
小鼠骨髓瘤细胞；Sp2/0-Ag14形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Mouse CCL24 ELISA KIT

猪肾传代细胞；IBRS－2形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Mouse Periostin ELISA KIT

小鼠肿瘤细胞；B82形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Human Flt3 Ligand ELISA KIT

脐静脉内皮细胞（人膀胱癌细胞污染）；ECV-304[ECV304；ECV304]形态特性: 内皮细胞样生长特性: 贴壁生长Feline CRP ELISA Kit

昆虫卵巢细胞；Sf21形态特性: 圆形，多形生长特性: 悬浮生长Mouse Endoglin ELISA KIT肝癌细胞；HepG2[HepG2]形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Sheep MMP-8 ELISA Kit

小鼠癌细胞；MA782/5S－8101形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长羊调节激活正常T-细胞表达分泌因子酶联免疫检测试剂盒

非洲绿猴肾细胞；VERO形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Feline PDGF-AB ELISA Kit

急性早幼粒白血病细胞；HL-60形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长羊白介素1β酶联免疫检测试剂盒

急性早幼粒白血病细胞；HL-60形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Sheep Apolipoprotein AI ELISA Kit

小鼠癌细胞；GR-M形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Feline PDGF-AA ELISA Kit

T淋巴瘤细胞；H9形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Canine (dog) HGF ELISA Kit

非洲绿猴肾细胞；BS-C-1形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Feline Adiponectin ELISA Kit

小鼠胚胎成纤维细胞；NIH/3T3形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Rabbit Adiponectin ELISA Kit

肝癌细胞；BEl-7402形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长牛纤溶酶原酶联免疫检测试剂盒

小鼠结缔组织L细胞株929克隆；L-929[L929]形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Monkey BMP7 ELISA Kit
神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17小鼠降钙素原(PCT)ELISA试剂盒Aβ1-40ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒Aβ1-40ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒Aβ1-40ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒Aβ1-40ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠神经生长导向因子Slit2ELISA试剂盒Aβ1-40ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒Aβ1-42ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA试剂盒Aβ1-42ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒Aβ1-42ELISAKit96T产品规格:48T/96T。