产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠肝脏、胰腺组织匀浆及细胞提取物中的葡萄糖激酶(GK)蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于糖代谢调控、糖尿病及胰岛素分泌研究等领域。
产品名称:大鼠葡萄糖激酶(GK)elisa试剂盒
英文名称:GK ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-5590E
检测原理:

大鼠葡萄糖激酶 (GK) ELISA 试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗大鼠 GK 抗体。
结合:加入标准品或样本,GK 被固相抗体捕获。
检测:加入生物su化的抗大鼠 GK 抗体和 HRP 标记的亲和素,形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1.试剂准备
将试剂盒平衡至室温(20-25℃),浓缩洗涤液按 1:20 稀释备用。
标准品按说明书进行梯度稀释,配制系列浓度标准曲线溶液。
2.实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、待测样品孔,空白孔仅加稀释液,其余孔分别加入标准品或待测样品,37℃孵育。
加酶标抗体:除空白孔外,每孔加入酶标抗体,轻轻混匀,37℃避光孵育。
洗涤:弃去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后甩干,重复洗涤 4-5 次,最后拍干残留液体。
显色:每孔加入 TMB 显色液,37℃避光孵育,孔内呈现蓝色。
终止:每孔加入终止液,混匀后颜色由蓝色转为黄色。
检测:在 450nm 波长下测定各孔 OD 值,15 分钟内完成读数。
3.关键提示
实验全程严格控温,孵育时使用封板膜避免蒸发。
洗涤需充分,否则易造成高背景、结果偏差。
显色液需避光,终止顺序与加样顺序保持一致,确保充分混匀。