本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的血管生成素 4（ANG-4）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于淋巴管生成、血管成熟、缺血组织修复及肿瘤血管调控研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 ANG-4 抗体。

结合：加入标准品或样本，ANG-4 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 ANG-4 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本处理

1) 血清：无菌无热源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 离心 10 min 取上清，-20℃分装，禁反复冻融。

2) 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝（慎用肝素），离心分离上清。

3) 细胞上清：1000×g 离心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 组织匀浆：预冷 PBS / 生理盐水冰上匀浆，高速离心取清亮上清低温保存。

2. 通用注意

严禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜绝溶血、浑浊、污染样本；全程低温防降解；超标样本用试剂盒专用稀释液稀释，实验建议设置复孔。

操作步骤：

1.试剂平衡试剂盒室温平衡 30 min；浓缩洗涤液按说明书稀释混匀。

2.设孔加样设空白、标准品、待测样品孔，精准加样，封板。

3.温育结合37℃孵育 30–60 min，弃液拍干。

4.洗板加满洗涤液浸泡，甩干拍干，重复3–5 次。

5.加酶结合物除空白孔外每孔加 HRP 标记液，封板 37℃孵育。

6.再次洗板充分洗净未结合游离酶，控干残留液体。

7.显色避光加显色液 A/B，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数加终止液变色稳定后，立刻酶标仪读 OD 值。

9.结果计算标准曲线拟合，换算样本浓度。

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