本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的芳香烷胺 N - 乙酰转移酶（AANAT）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于褪黑素合成、昼夜节律、松果体功能及血清素代谢转化研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 AANAT 抗体。

结合：加入标准品或样本，AANAT 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 AANAT 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本处理

1) 血清：无菌无热源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 离心 10 min 取上清，-20℃分装，禁反复冻融。

2) 血浆：EDTA / 柠檬酸盐抗凝（慎用肝素），离心分离上清。

3) 细胞上清：1000×g 离心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 组织匀浆：预冷 PBS / 生理盐水冰上匀浆，高速离心取清亮上清低温保存。

2. 通用注意

严禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜绝溶血、浑浊、污染样本；全程低温防降解；超标样本用试剂盒专用稀释液稀释，实验建议设置复孔。

操作步骤：

1.试剂提前室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按说明书稀释配制。

2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔，精准加样后封板。

3.37℃恒温孵育结合反应，结束后弃孔内液体拍干。

4.加满洗涤液浸泡清洗，重复洗板 3–5 次，去除未结合杂质。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶结合物，再次 37℃温育。

6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体，保证背景干净。

7.依次加入显色液避光显色，待梯度蓝色清晰显现。

8.加入终止液终止反应，颜色由蓝转黄，即刻用酶标仪读取 OD 值。

9.根据标准曲线拟合计算，得出样本目标物质浓度。

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