产品简介：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆中的 LBP 蛋白浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于内毒素血症、炎症反应、脓毒症及免疫防御研究等领域。

产品名称：大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)elisa试剂盒

英文名称：LBP ELISA Kit

产品规格：48T/96T

产品货号：CS-5224E

检测原理：

大鼠脂多糖结合蛋白 (LBP) elisa 试剂盒的原理是‌双抗体夹心法‌，通过固相载体捕获抗原，再用酶标记的检测抗体进行识别，最后通过底物显色反应来定量检测。

‌固相化‌：微孔板预先包被抗大鼠 LBP 抗体。

‌结合‌：加入标准品或样本，LBP 被固相抗体捕获。

‌检测‌：加入生物su化的抗大鼠 LBP 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

‌显色‌：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。

‌测定‌：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

实验步骤‌：

1. 试剂准备

将试剂盒所有组分平衡至室温（20–25℃，≥30min）；浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。

标准品用标准品稀释液复溶，梯度稀释，配置系列浓度梯度标准溶液，备用。

2. 实验流程

加样：设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本，封板，37℃恒温孵育 90 min。

洗涤：弃净孔内液体，每孔加满洗涤工作液，静置 30 s，甩干拍净，重复洗涤 5 次。

加酶结合物：每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体，封板混匀，37℃孵育 60 min。

洗涤：重复上述洗涤步骤 5 次，拍干微孔。

显色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液，轻柔混匀，37℃避光显色 15 min。

终止：按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液，轻晃混匀，溶液由蓝转黄。

读数：15 min 内，酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值，拟合标准曲线计算样本含量。

3. 关键质控要点

全程孵育使用专用封板膜，防止液体蒸发、交叉污染。

洗涤充分为实验核心，残留洗液易造成背景偏高、假阳性。

TMB 显色液避光储存，现用现加，严禁接触氧化剂。

加终止液顺序需与显色加样一致，避免局部色差、绿色残留。

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操作步骤‌：

‌1、试剂与样本准备‌：

将试剂盒平衡至室温（20-25℃），按说明书稀释洗涤缓冲液（通常1:19）。

‌标准品‌：用梯度稀释至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列浓度。

‌样本‌：血清、血浆或组织匀浆上清。若t-PA浓度高，可按说明书（如1:10）稀释。

‌2、加样与孵育‌：

每孔加入100μL标准品或样本。

轻轻振荡混匀，避免触碰孔壁。

37℃孵育90分钟（部分试剂盒可能为120分钟，需以说明书为准）。

‌3、洗涤‌：

弃去孔内液体，用洗涤缓冲液加满每孔，静置30秒后甩干，重复5-6次。

4‌、加检测抗体与孵育‌：

每孔加入100μL化抗猪t-PA检测抗体。

37℃孵育60分钟。

5‌、再次洗涤‌：

同步骤3，洗去未结合抗体。

6‌、显色‌：

每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。

37℃避光孵育10-15分钟。

‌7、终止与测定‌：

每孔加入50μL终止液，立即混匀（颜色由蓝变黄）。

在加终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度（OD值）。