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产品名称 | 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞;MC3T3-E1 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63217 |
细胞名称 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞;MC3T3-E1
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞有多个亚,可以作为体外研究成骨细胞分化的良好模型,尤其是ECM信号通路的作用。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法: 1:6~1:8传代;2~3天1次。
传代情况: C5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞,以0.25%消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞);YAC-1形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Mouse IL-1α ELISA KIT
人导管癌细胞;ZR-75-1形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Bovine GLUT1/SLC2A1 ELISA Kit
人皮肤鳞癌细胞;A-431[A431]形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Rat IL-4 ELISA KIT
非洲绿猴肾细胞;CV-1形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Human VCAM-1 ELISA KIT
人低分化肺腺癌细胞;GLC-82[GLC82]形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Mouse IgE ELISA KIT
人喉癌上皮细胞;Hep-2形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Rat CXCL1 ELISA KIT
人黑色素瘤细胞;A875形态特性: 多角形生长特性: 贴壁生长Human CX3CL1 ELISA KIT
小鼠原B细胞株;BaF3形态特性: 圆形生长特性: 悬浮生长Bovine IL-4 ELISA Kit
小鼠脑瘤细胞;BC3H1形态特性: 多角生长特性: 贴壁生长Rat β-NGF ELISA KIT
叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Human DPPIV ELISA KIT
非洲绿猴肾细胞;BS-C-1形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human Myeloperoxidase ELISA KIT
小鼠成肌细胞;C2C12形态特性: 成纤维细胞样;梭形生长特性: 贴壁生长Human Chitinase-3-like Protein 1(YKL-40 ELISA KIT
人结直肠腺癌细胞;Caco-2形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Mouse IFN-β ELISA KIT
人上皮细胞;CaSki[CaSki]形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human IgG(Total) ELISA KIT
人髓母细胞瘤细胞;D341Med形态特性: 圆形生长特性: 悬浮生长Rat EGF ELISA KIT
人结直肠腺癌细胞;HCT-8[HRT-18]形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human Galectin-3 ELISA KIT
小鼠胚胎成骨细胞前体细胞;MC3T3-E1小鼠甲状腺素(T4)ELISA试剂盒5-NTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠*状腺原氨(T3)ELISA试剂盒6-K-PGELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠17羟孕(17-OHP)ELISA试剂盒6-K-PGELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠雌三醇(E3)ELISA试剂盒6-K-PGELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠雄烯二(ASD)ELISA试剂盒6-K-PGF1aELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠游离睾(F-TESTO)ELISA试剂盒6-K-PGF1aELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠睾(T)ELISA试剂盒6-K-PGF1aELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠孕激素/孕(PROG)ELISA试剂盒6-K-PGF1aELISAKit产品规格:48T/96T。