公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
SV40T转化的胚肾细胞;293T | 贴壁生长 | EY-X63210 |
细胞名称 SV40T转化的胚肾细胞;293T
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 表达SV40大T抗原,可用于转染和作为包装细胞;用于瞬时转染时可高表达AP融合蛋白。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:4~8传代;26~36小时1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
Anti-Apo-E 载脂蛋白E抗体 0.1ml
Anti-APP695/770 淀粉样肽前体蛋白抗体 0.1ml
Anti-AQP-2 水通道蛋白-2抗体 0.1ml
Anti-AQP-3 水通道蛋白-3抗体 0.1ml
Anti-AQP4 水通道蛋白-4抗体 0.1ml
Anti-AR 雄激素受体抗体 0.1ml
Anti-ARC ARC抗体 0.2ml
Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗体 0.2ml
Anti-Aromatase P450 芳香化酶/细胞色素P450/P450抗体 0.1ml
anti-ARIP2a 激活素受体2A/激活素受体相互作用蛋白2a抗体 0.1ml
anti-β-arrestin 1/2 β-抑制蛋白1/2抗体 0.1ml
anti-ARIP2B 激活素受体2B/激活素受体相互作用蛋白2b抗体 0.2ml
Anti-ART 胶质细胞系源性神经营养因子GDNF的一种抗体 0.1ml
Anti-ARα1 α1肾上腺素能受体抗体 0.1ml
Anti-ASCL1/MASH1 神经母细胞特异性转移因子抗体 0.1ml
anti-ASPP1 p53凋亡刺激蛋白1抗体 0.1ml
anti-ASPP2 P53凋亡刺激蛋白2 0.1ml
Anti-AT/AGT 血管紧张素原抗体 0.1ml
Anti-AT1R 血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体 0.2ml
Anti-ATF1 活化复制因子1抗体 0.1ml
Anti-ATF2 活化复制因子2抗体 0.2ml
Anti-ATF3 活化转录因子3抗体 0.2ml
Anti-B7-H1/PDL1/CD274 程序性死亡配体1抗体 0.1ml
Anti-B7-H4 B7H4抗体 0.2ml
Anti-BACE/ASP2 β分泌酶抗体 0.1ml
Anti-Bad 相关死亡促进因子Bad抗体 0.1ml
anti-Bak Bcl-2同源拮抗剂Bak抗体 0.1ml
Anti-BADH2 BADH2抗体 0.1ml
人(TP-5)elisa试剂盒 Human Thymopentin, TP-5 Elisa Kit 96T/48T
人(Thymosin)elisa试剂盒 Human Thymosin Elisa Kit 96T/48T
人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1elisa试剂盒 Human Non-Phosphorylated Insulin-like growth factor binding protein 1 Elisa Kit 96T/48T
人甲状旁腺激素样蛋白(PLP)elisa试剂盒 Human parathyroid hormone-like protein, PLP Elisa Kit 96T/48T
人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)elisa试剂盒 Human visfatin Elisa Kit 96T/48T
人apelin 12(AP12)ELISA Ki Human apelin 12, AP12 Elisa Kit 96T/48T
人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)elisa试剂盒 Human Glucose dependent insulin releasing polypeptide, GIP Elisa Kit 96T/48T
人胰岛素原(PI)elisa试剂盒 Human Proinsulin, PI Elisa Kit 96T/48T
人胰岛素受体β(ISR-β)elisa试剂盒 Human Insulin Receptor β, ISR-β Elisa Kit 96T/48T
人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)elisa试剂盒 Human Glycated hemoglobin A1c, GHbA1c Elisa Kit 96T/48T
人胰高血糖素样肽1(GLP-1)elisa试剂盒 Human ghcagons-like pepfide 1, GLP-1 Elisa Kit 96T/48T
人甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)elisa试剂盒 human thyroid stimulating immunoglobulin, TSI Elisa Kit 96T/48T
人甲状旁腺激素(PTH)elisa试剂盒 human Parathyroid hormone, PTH Elisa Kit 96T/48T
人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)elisa试剂盒 human Prostaglandin D2-methoxime, PGD2-MOX Elisa Kit 96T/48T
人高敏甲状腺素(u-T4)elisa试剂盒 human Ultrasensitivity Thyroxine, u-T4 Elisa Kit 96T/48T
SV40T转化的胚肾细胞;293T人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)elisa试剂盒 human ultrasensitive thyroid-stimulating hormone, U-TSH Elisa Kit 96T/48T
人多巴胺(DA)elisa试剂盒 human dopamine, DA Elisa Kit 96T/48T
人(AZT)elisa试剂盒 human Azidothymidine, AZT Elisa Kit 96T/48T
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。